RF/6A細胞（猴脈絡膜視網膜內(nei) 皮細胞）

RF/6A細胞是從(cong) 恒河猴（Macaca mulatta）64天孕期胎兒(er) 的脈絡膜和視網膜內(nei) 皮細胞中分離。RF/6A細胞在培養(yang) 早期發生了自發性轉化，至今已傳(chuan) 代超過540次，在細胞形態上表現為(wei) 上皮樣。RF/6A細胞廣泛應用於(yu) 視網膜疾病研究和藥物篩選，其作為(wei) 滋養(yang) 層可有效支持眼色素上皮細胞的貼壁與(yu) 增殖。在高代次傳(chuan) 代後，RF/6A細胞表現出優(you) 良的貼壁和增殖特性，成為(wei) 探索視網膜相關(guan) 病理機製的重要工具，尤其在眼科領域的研究中具有重要價(jia) 值。

RF/6A細胞特性特征

• RF/6A細胞為(wei) 自發永生化的細胞係，已傳(chuan) 代超過540次，適合在標準培養(yang) 條件下進行長期培養(yang) 。

• Weibel-Palade顆粒: 電鏡觀察顯示RF/6A細胞中存在Weibel-Palade顆粒，這些顆粒是內(nei) 皮細胞特有的結構，參與(yu) 血管功能和血液凝固過程。
  

• 基因表達: RF/6A細胞表達因子VIII和纖維連接蛋白基因。

• 應用於(yu) 滋養(yang) 層: 高代次的RF/6A細胞常用於(yu) 作為(wei) 滋養(yang) 層，以增強其他細胞（如眼色素層黑素細胞）的貼壁能力、轉接能力和供養(yang) 。

RF/6A猴脈絡膜視網膜內皮細胞參數表

RF/6A猴脈絡膜視網膜內皮細胞培養教程

RF6A細胞複蘇步驟

• 取出凍存管，立即放入37℃水浴中，輕輕搖晃至細胞完全解凍。
  

• 解凍後，將RF6A細胞懸液轉移至含4-6 mL完全培養(yang) 基的離心管中，並輕輕混勻。

• 以1000 RPM離心3-5分鍾，去除上清液。
  

• 用1-2 mL完全培養(yang) 基重懸RF6A細胞沉澱。

• 將重懸的RF6A細胞加入含6-8 mL完全培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。
  

• 第二天使用顯微鏡檢查RF6A細胞的貼壁情況和生長狀態，確認複蘇後的細胞生長正常。

RF6A細胞傳代步驟

• 當RF6A細胞密度達到80%-90%時，可進行傳(chuan) 代操作。
  

• 棄去舊培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS輕輕洗滌RF6A細胞1-2次，以去除培養(yang) 基殘留和死細胞。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液（T25培養(yang) 瓶1-2 mL，T75培養(yang) 瓶2-3 mL），在37℃下消化1-2分鍾。
  

• 在顯微鏡下觀察RF6A細胞消化情況，待細胞開始圓化脫落後，迅速加入3-4 mL含10% FBS的培養(yang) 基中和消化液。

• 以1000 RPM離心3-5分鍾，去除上清，再用1-2 mL完全培養(yang) 基輕輕重懸RF6A細胞。
  

• 將RF6A細胞懸液按1:2比例分種至新的T25培養(yang) 瓶中，添加6-8 mL新鮮培養(yang) 基，置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

RF6A細胞凍存步驟

• 傳(chuan) 代時收集離心後的RF6A細胞沉澱，加入預先準備的凍存液，輕輕混勻。
  

• 將RF6A細胞懸液分裝至已標記的凍存管中，每管約1 mL。
  

• 將凍存管置4℃靜置5-10分鍾，移至-20℃保存2小時，再置入-80℃過夜。
  

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中放入-80℃冰箱冷凍過夜。如無程序降溫盒，按以下步驟：

• 次日將凍存管轉入液氮罐長期保存，確保記錄RF6A細胞的存放位置，便於(yu) 後續取用。

注意事項

• 消化時間控製: 胰蛋白酶消化時間應依據不同品牌進行調整，以避免過度消化影響RF6A細胞活力。

• 無菌操作: 培養(yang) 期間需嚴(yan) 格保持無菌條件，避免汙染。

• RF6A細胞的高代次用途: 高代次的RF6A細胞可用於(yu) 構建滋養(yang) 層，以增強其他貼壁細胞的生長能力，特別是對眼色素上皮細胞具有顯著的支持效果。