ARPE-19細胞（人視網膜上皮細胞）

ARPE-19人視網膜上皮細胞是一種源自19歲健康男性的視網膜色素上皮（RPE）細胞係，該男性因車禍致命性頭部創傷(shang) 去世。ARPE19細胞係由Amy Aotaki-Keen於(yu) 1986年建立，通過選擇性胰蛋白酶處理，從(cong) 眼組織的前幾代細胞中去除表麵細胞，最終在第5代時獲得快速生長的RPE細胞，ARPE19細胞在培養(yang) 數月後呈現鵝卵石樣單層並著色。

ARPE-19細胞在低血清培養(yang) 條件下，當種植於(yu) 層粘連蛋白塗層的Transwell COL膜上時，表現出明顯的形態學極化，並在培養(yang) 4周後形成緊密連接，跨上皮電阻達到50至100歐姆/平方厘米的最大值。

ARPE-19細胞特性特征

• 抗原表達：RPE特異性標記CRALBP和RPE-65

• 基因表達：RPE特異性標記CRALBP；RPE特異性標記物RPE-65

• 倍體(ti) 狀態: ARPE-19細胞為(wei) 二倍體(ti) ，能夠在傳(chuan) 代中保持穩定，通常可傳(chuan) 代30代以上。在ATCC的鑒定過程中，ARPE19細胞後代可進一步傳(chuan) 代48次。
  

• 培養(yang) 條件: ARPE-19細胞係Dulbecco改良的Eagles培養(yang) 基和Ham的F12培養(yang) 基與(yu) HEPES緩衝(chong) 液的1:1混合物中建立，HEPES緩衝(chong) 溶液含有20%胎牛血清、56 mM終濃度碳酸氫鈉和2 mM L-穀氨酰胺，並在37℃的10%CO2中孵育。

• 科研用途: ARPE-19細胞廣泛應用於(yu) 眼科研究、藥物篩選、細胞生物學和3D細胞培養(yang) 等領域。由於(yu) 其穩定性和易於(yu) 培養(yang) 的特性，ARPE-19細胞也被視為(wei) 理想的轉染宿主
  

ARPE-19細胞參數表

ARPE-19人視網膜上皮細胞培養教程

培養基成分與條件匯總

• 基礎培養(yang) 基: DMEM/F-12與(yu) Ham's F12培養(yang) 基的1:1混合物。

• 胎牛血清: 10% FBS。

• 緩衝(chong) 液: HEPES緩衝(chong) 液，含20% FBS、56 mM碳酸氫鈉和2 mM L-穀氨酰胺。

ARPE19細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮中取出凍存的ARPE19細胞管，並迅速放入37℃水浴中，輕輕搖動直至細胞完全解凍。

• 解凍後，將ARPE19細胞立即轉移到含有10ml完全培養(yang) 基的離心管中。

• 以1000rpm的速度離心3-5分鍾，棄去上清。

• 向ARPE19細胞沉澱中加入適量的新鮮完全培養(yang) 基，輕輕重懸細胞。

• 將ARPE19細胞轉移至預先準備好的培養(yang) 瓶中，並放入37℃培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

ARPE19細胞傳代方法

• 換液頻率: 每2-3天更換一次培養(yang) 基，以確保ARPE19細胞的營養(yang) 供應。

• 傳(chuan) 代比例: 傳(chuan) 代時可根據ARPE19細胞的生長狀態和密度選擇1:2至1:4的比例。

• 吸除培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基。

• 加入3-4ml常溫PBS，輕輕搖晃培養(yang) 瓶，潤洗ARPE19細胞層10-20秒，隨後吸去PBS。

• 加入1ml胰蛋白酶，輕輕晃動培養(yang) 瓶，使胰酶均勻覆蓋ARPE19細胞表麵。

• 將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中，觀察ARPE19細胞消化過程。當細胞間隙增大但未完全脫落時，迅速加入2-3ml完全培養(yang) 基終止消化。

• 用移液器輕輕混勻ARPE19細胞，隨後以900rpm離心3-5分鍾，棄去上清。

• 加入新鮮的完全培養(yang) 基重懸ARPE19細胞，將細胞均勻分配至新的培養(yang) 瓶中。

• 補足完全培養(yang) 基後，將培養(yang) 瓶放入培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

ARPE19細胞凍存步驟

• 當ARPE19細胞達到適宜密度時，進行傳(chuan) 代並準備凍存。

• 將ARPE19細胞重懸於(yu) 凍存液中（含60%培養(yang) 基、30%胎牛血清和10%二甲基亞(ya) 碸（DMSO））。

• 將重懸後的ARPE19細胞分裝至凍存管中，並逐漸降溫（可使用程序降溫器）。

• 最後將凍存管移至液氮中長期保存。

注意事項

• 胰蛋白酶的品牌不同，其消化時間也會(hui) 有所差異，需根據經驗控製消化時間，避免ARPE19細胞過度消化造成損傷(shang) 。

• 傳(chuan) 代時，需輕柔吹打以避免ARPE19細胞損傷(shang) ，並確保細胞均勻分布。

• 定期檢查ARPE19細胞形態及生長狀態，確保細胞健康。