HCE-T細胞（人角膜上皮細胞）

HCE-T細胞係是通過一位49歲女性的角膜組織進行SV40病毒轉化建立，表現出典型的上皮細胞形態，且能夠產(chan) 生64kD角蛋白。HCE-T細胞通過應用SV40-Adeno載體(ti) 的轉化技術實現了永生化，在體(ti) 外具有長期增殖能力。

HCE-T細胞特性特征

• 角蛋白表達：HCE-T細胞能夠產(chan) 生64kD的角蛋白。

• 細胞膜特性：研究表明HCE-T細胞對自然殺傷(shang) 細胞具有高度敏感性，適合用作體(ti) 外靶標。

• 基因特征：HCE-T細胞係的基因特征與(yu) 角膜上皮細胞相關(guan)

• HCE-T細胞表達與(yu) 角膜上皮細胞功能相關(guan) 的基因，如角蛋白基因。

• 通過轉化後的HCE-T細胞係具有一定的基因穩定性，使其在實驗中表現出一致的生物學特性

HCE-T細胞參數表

HCE-T人角膜上皮細胞培養教程

細胞複蘇

• 將水浴鍋預熱至37℃。
  

• 準備D/F12培養(yang) 基，內(nei) 含15%胎牛血清（FBS）及5μg/ml抗生素（如青黴素和鏈黴素），確保培養(yang) 基適用於(yu) HCET細胞的複蘇。

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的HCET細胞，將其迅速置於(yu) 37℃的水浴中，輕輕搖動凍存管，使HCET細胞在1-2分鍾內(nei) 完全解凍。
  

• 解凍後，立即將HCET細胞懸液轉移至含有5ml預熱好的培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻。

• 以1000 rpm離心5分鍾，去除凍存保護劑（如DMSO或甘油）。

• 將HCET細胞沉澱重懸於(yu) 5-10ml新鮮培養(yang) 基中，然後將細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，置於(yu) 培養(yang) 箱內(nei) 培養(yang) 。

HCET細胞培養

• 將HCET細胞培養(yang) 瓶放置於(yu) 37℃、5% CO₂的恒溫培養(yang) 箱中。
  

• 每2-3天更換培養(yang) 基，確保培養(yang) 基新鮮，並適時觀察HCET細胞的生長狀況。

• HCET細胞應展現出典型的上皮細胞形態，貼壁生長良好。
  

• 當HCET細胞密度達到80%-90%時，應準備進行傳(chuan) 代操作。

HCET細胞傳代

• 用無菌PBS緩衝(chong) 液輕柔洗滌HCET細胞，去除殘餘(yu) 的舊培養(yang) 基。
  

• 加入適量的胰酶（濃度為(wei) 0.05%-0.25%），輕輕搖晃培養(yang) 瓶以使HCET細胞從(cong) 瓶壁脫落。

• 觀察HCET細胞完全脫落後，立即加入培養(yang) 基中和胰酶以終止消化作用。
  

• 將HCET細胞懸液以1000 rpm離心5分鍾，去除胰酶。

• 將HCET細胞沉澱重懸於(yu) 新鮮培養(yang) 基中，按1:2至1:4的比例分種至新的培養(yang) 瓶中，繼續培養(yang) 。

HCET細胞凍存

• 當HCET細胞密度達到80%-90%時，進行細胞凍存操作。
  

• 準備好凍存液，通常為(wei) 含5%-15% DMSO或甘油的培養(yang) 基。

• 將HCET細胞沉澱重懸於(yu) 凍存液中，混勻後分裝至凍存管內(nei) 。
  

• 使用“慢凍快融”方法：以-1至-2℃/分鍾的速度緩慢冷凍至-80℃，隨後將凍存管轉移至液氮中進行長期保存。

注意事項

• 在HCET細胞操作過程中，確保所有器材和試劑均已進行無菌處理，以避免細胞汙染。

• HCET細胞生長過程中，應定期觀察其形態和生長情況，如有異常及時調整培養(yang) 條件。

• 詳細記錄每次傳(chuan) 代、凍存的日期及HCET細胞狀態，以便進行後續研究及追蹤。