PA-1細胞（人卵巢畸胎瘤細胞）

PA-1細胞係源自一名12歲白人女性卵巢畸胎瘤患者的腹腔積液，呈現上皮樣形態，是貼壁生長的細胞係。

在特定條件下，如低血清濃度、低平板密度或經5-溴-2'-脫氧尿苷處理後，PA-1細胞可以形成緊密的編織狀克隆，並能分化為(wei) 胚狀體(ti) 。這些細胞表達胚胎抗原PCC4，但未檢測到F9的表達。

PA-1細胞特性特征

• 胚胎抗原表達：表達胚胎抗原PCC4，但未檢測到F9的表達。
  

• HLA抗原表達：表達HLA-A28和B12抗原。

• 酶活性：表現出葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）和同工酶B的活性。

• 癌基因表達：表達激活的N-ras癌基因。
  

• 致瘤性：在裸鼠體(ti) 內(nei) 具有高致瘤性。當皮下接種10^7個(ge) 細胞時，21天內(nei) 100%（5/5）形成腫瘤。
  

• 轉移能力：具備腹水轉移能力。

• 分化潛能：在特定條件下（如低血清濃度、低平板密度或經5-溴-2'-脫氧尿苷處理），可形成緊密的編織狀克隆，並能分化為(wei) 胚狀體(ti)

PA-1人卵巢畸胎瘤細胞參數表

PA-1人卵巢畸胎瘤細胞培養教程

解凍步驟

• 將PA-1細胞凍存管在37°C水浴中快速解凍。

• 將解凍後的PA-1細胞懸液轉移到含10 ml預熱培養(yang) 基的15 ml離心管中。

• 1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清液，用新鮮培養(yang) 基重懸PA-1細胞。

• 將PA-1細胞懸液轉移到培養(yang) 瓶中，放入37°C、5% CO2培養(yang) 箱中。

傳代步驟

• 當PA-1細胞匯合度達到80-90%時進行傳(chuan) 代。

• 棄去舊培養(yang) 基，用PBS輕柔洗滌PA-1細胞1-2次。

• 加入適量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C消化2-3分鍾。

• 通過顯微鏡觀察，當PA-1細胞開始變圓並脫落時，輕拍培養(yang) 瓶。

• 加入含血清的培養(yang) 基以終止消化。

• 1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸PA-1細胞。

• 按1:4至1:10的比例將PA-1細胞接種到新的培養(yang) 瓶中。

• 每周傳(chuan) 代2-3次。

細胞活力檢測

• 使用台盼藍染色法

• 取0.5 ml PA-1細胞懸液，加入0.5 ml 0.4%台盼藍染液。

• 混勻後，室溫下染色2-3分鍾。

• 取少量混合液放入血球計數板中。

• 顯微鏡下計數，藍色為(wei) 死細胞，無色透明為(wei) 活細胞。

• 計算PA-1細胞的活細胞比例。

特殊處理

• 低血清條件培養(yang) ：適用於(yu) 特定實驗，如PA-1細胞的分化實驗。

• 5-溴-2'-脫氧尿苷處理：可促進PA-1細胞的分化。

注意事項

• 嚴(yan) 格遵循無菌操作，避免PA-1細胞汙染。

• 定期觀察PA-1細胞的形態和生長狀態。

• 避免過度消化，以免損傷(shang) PA-1細胞。

• 傳(chuan) 代時保持適當的PA-1細胞密度。

• 定期進行支原體(ti) 檢測。

• 每3-4個(ge) 月進行一次STR鑒定，以確保PA-1細胞係的純度。

常見實驗錯誤

• 無菌操作不當：未正確使用生物安全櫃，可能引入PA-1細胞汙染。

• 培養(yang) 條件不適：溫度、CO2濃度或濕度不合適，培養(yang) 基配方或pH值不正確。

• 傳(chuan) 代操作不當：過度消化損傷(shang) PA-1細胞，接種密度不適合。

• 細胞鑒定不足：未定期進行STR鑒定，忽視PA-1細胞的形態變化。

• 試劑使用不當：使用過期或汙染的試劑；未按要求儲(chu) 存和使用試劑。

• 記錄不完整：未詳細記錄PA-1細胞的實驗過程和觀察結果；缺乏細胞係來源和傳(chuan) 代次數的記錄。

• 細胞凍存和複蘇操作不當：凍存保護劑使用不當；複蘇過程操作不正確。

• 忽視細胞活力檢測：未定期進行活力檢測；使用活力低下的PA-1細胞進行實驗。

• 交叉汙染：同時處理多種細胞時未注意防止交叉汙染。

• 環境因素忽視：忽視實驗室溫度、濕度等環境因素的影響。