小鼠原代肺成纖維細胞

小鼠肺成纖維細胞（Mouse Lung Fibroblasts）來源於(yu) 健康小鼠的肺組織，肺是位於(yu) 胸腔內(nei) 的重要呼吸器官，共有五個(ge) 肺葉（左二右三）。小鼠原代肺成纖維細胞由胚胎間充質細胞分化而來，是肺間質的主要組成部分，在維持肺的正常結構和功能中起關(guan) 鍵作用。

形態上，成纖維細胞呈紡錘形或星形的扁平結構，核橢圓形，核仁明顯，細胞質透明。小鼠原代肺成纖維細胞主要功能包括分泌細胞外基質（如III型膠原和彈性蛋白），維持肺泡和間質的形態，及在肺損傷(shang) 後通過增殖和遷移促進修複；在病理狀態下，這些細胞會(hui) 被激活，過度分泌膠原蛋白及其他基質組分，導致纖維化等異常。

實驗中，常選用C57BL/6或BALB/c等小鼠品係，通過肺組織的心髒灌注清洗、剪碎酶解、離心過濾等步驟分離並純化細胞。小鼠肺成纖維細胞是研究肺纖維化、炎症、腫瘤及其他肺部疾病的重要模型，廣泛應用於(yu) 病理機製探討、藥物篩選、基質生物學和組織工程研究中，為(wei) 肺部相關(guan) 生物學研究提供了基礎支持。

小鼠肺成纖維細胞特性特征

• 功能特征：主要負責合成和分泌細胞外基質成分，如III型膠原、彈性蛋白和蛋白多糖。在肺部受損或炎症時，成纖維細胞會(hui) 被激活並增殖，遷移至損傷(shang) 部位以促進修複和再生。

• 小鼠肺成纖維細胞通常通過免疫熒光染色檢測出以下標記物：波形蛋白（Vimentin）、纖維連接蛋白（Fibronectin）。

• 基因表達：成纖維細胞的基因組中，涉及膠原合成、細胞遷移和增殖的基因表達顯著上調。這些基因包括：COL1A1、COL3A1：編碼I型和III型膠原。

• FAP（成纖維細胞活化蛋白）：與(yu) 成纖維細胞的活化狀態相關(guan) 。

• 信號通路：小鼠肺成纖維細胞在響應炎症或損傷(shang) 時，常通過TGF-β、IL-6等信號通路被激活，這些通路促進了膠原合成及細胞增殖。

小鼠原代肺成纖維細胞參數表

小鼠原代肺成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 在無菌環境下進行操作，例如使用生物安全櫃。
  

• 準備培養(yang) 基（如DMEM，含10%胎牛血清）和複蘇所需器材。

• 將存儲(chu) 在液氮中的小鼠原代肺成纖維細胞凍存管取出，立即置於(yu) 37℃水浴中快速解凍。
  

• 解凍後，將細胞懸液轉移至含4 mL培養(yang) 基的無菌離心管中，混勻。

• 在1000 rpm離心3分鍾後，棄去上清液，加入新鮮培養(yang) 基1-2 mL輕輕吹打重懸細胞。
  

• 將細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基（如10 cm培養(yang) 皿加8 mL培養(yang) 基）。
  

• 在37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜，讓小鼠原代肺成纖維細胞適應新的培養(yang) 環境。

細胞傳代

• 檢查小鼠原代肺成纖維細胞的生長情況，當細胞達到80%-90%匯合時，進行傳(chuan) 代操作。
  

• 棄去培養(yang) 基，用無鈣、無鎂PBS緩衝(chong) 液輕輕衝(chong) 洗1-2次，以去除殘餘(yu) 培養(yang) 液。
  

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，確保覆蓋所有細胞。
  

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱內(nei) 消化1分鍾，觀察細胞形態是否變圓並脫落。

• 輕敲培養(yang) 瓶，加入培養(yang) 基終止消化液的作用。
  

• 將細胞懸液轉入離心管，在1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液，加入新鮮培養(yang) 基重懸細胞。
  

• 按1:2或1:3的比例稀釋小鼠原代肺成纖維細胞，分配至新培養(yang) 皿或培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 生長良好的小鼠原代肺成纖維細胞經胰酶消化後，轉入離心管中，以1000 rpm離心4分鍾。
  

• 用無血清凍存液重懸細胞，調整濃度至5×10⁶至1×10⁷/mL。
  

• 每支凍存管加入1 mL細胞懸液，並標明小鼠原代肺成纖維細胞的具體(ti) 信息。
  

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，緩慢降溫至-80℃，24小時後轉移至液氮罐長期保存。