大鼠原代心肌成纖維細胞

大鼠原代心肌成纖維細胞（Rat Primary Cardiac Fibroblasts）是心髒組織中最主要的非肌肉細胞類型，占心髒細胞總數的60%-70%，在心髒的發育、損傷(shang) 修複和組織重塑中起關(guan) 鍵作用。

大鼠原代心肌成纖維細胞來源於(yu) 大鼠心髒組織，通常通過外科取心、酶解（如膠原酶和胰蛋白酶）以及差速貼壁法分離純化。心肌成纖維細胞具有重要的生理功能，能夠分泌膠原蛋白、彈性纖維及網狀纖維，維持心髒結構穩定性，並通過旁分泌生長因子調節心肌細胞功能。當心肌受損時，成纖維細胞可重新轉變為(wei) 幼稚狀態，恢複功能活性，參與(yu) 組織修複。

大鼠原代心肌成纖維細胞特性特征

• 心肌成纖維細胞表達多種標誌性蛋白：膠原蛋白（如COL1A1、COL3A1）、α-SMA（平滑肌α-肌動蛋白）、生長因子（如TGF-β）。

• 基因特征：大鼠心肌成纖維細胞的基因表達譜顯示出與(yu) 心髒發育、修複及病理變化相關(guan) 的多種基因，包括調控細胞增殖、遷移及基質合成的基因。這些基因在不同的生理和病理條件下可能表現出不同的表達水平。

大鼠心肌成纖維細胞參數表

大鼠原代心肌成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 準備好37℃水浴鍋。
  

• 配製適合大鼠心肌細胞培養(yang) 的培養(yang) 基，推薦使用含10%胎牛血清（FBS）和1%青鏈黴素的高糖DMEM培養(yang) 基。

• 將凍存管從(cong) 液氮或-80℃冰箱中取出，迅速轉移至37℃水浴中搖勻解凍，通常需要1-2分鍾，直至大鼠心肌細胞完全融化。
  

• 將解凍後的細胞懸液轉移至15 mL離心管中，加入5 mL預熱的培養(yang) 基以稀釋DMSO。
  

• 以1000 rpm離心3-5分鍾，去除上清液，保留細胞沉澱。

• 加入新鮮培養(yang) 基（約5 mL）重新懸浮大鼠心肌細胞，輕輕吹打均勻。
  

• 將細胞懸液接種至T-25或T-75培養(yang) 瓶中，放置於(yu) 37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中培養(yang) 。
  

• 細胞複蘇24小時後，及時更換培養(yang) 基以清除未附著的大鼠心肌細胞和殘餘(yu) DMSO。
  

細胞傳代

• 當大鼠心肌細胞生長至70%-80%融合時，可以開始傳(chuan) 代操作。
  

• 用PBS洗滌培養(yang) 瓶以去除殘留培養(yang) 基。
  

• 加入適量胰蛋白酶-EDTA（0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA）消化液，置於(yu) 37℃孵育約5分鍾，直至大鼠心肌細胞變圓且開始脫落。

• 加入等體(ti) 積的新鮮培養(yang) 基，終止胰蛋白酶的作用，並輕輕吹打以分離細胞。
  

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液，重新用培養(yang) 基懸浮細胞並計數。
  

• 按照1×10⁵個(ge) /mL的接種密度，將大鼠心肌細胞分裝至新的培養(yang) 瓶中，置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。
  

凍存培養

• 使用含10% DMSO的冷凍保護劑，推薦將DMSO與(yu) 胎牛血清按照9:1的比例混合製備。
  

• 當大鼠心肌細胞融合至70%-80%時，按照傳(chuan) 代步驟消化細胞並離心收集。
  

• 用冷凍保護劑將大鼠心肌細胞重懸至1-2×10⁶個(ge) /mL的濃度，並輕輕混勻。
  

• 每管加入1 mL細胞懸液，確保冷凍管標記清晰。
  

• 使用含異丙醇的冷凍盒，緩慢降溫至-80℃（每分鍾降低1℃），預冷過夜後轉入液氮罐中長期保存。
  

• 確保冷凍和複蘇過程溫度變化平緩，避免冰晶損傷(shang) 大鼠心肌細胞。