小鼠原代骨骼肌細胞

小鼠骨骼肌細胞是從(cong) 小鼠四肢骨骼肌組織分離得到的細胞，屬於(yu) 橫紋肌的一種。骨骼肌在人體(ti) 內(nei) 占據重要地位，約占體(ti) 重的40%，由多核的長柱形細胞組成，其細胞膜外部緊貼基膜。骨骼肌細胞在機體(ti) 隨意運動中起關(guan) 鍵作用，依靠豐(feng) 富的血管、淋巴組織以及軀體(ti) 神經的支配實現收縮或舒張功能。根據其形態、大小、位置以及功能特點，骨骼肌可進一步命名，如斜方肌、菱形肌、三角肌等。

骨骼肌細胞的結構特點包括纖維狀的外形、不分支的排列方式及明顯的橫紋。在細胞膜下方聚集著多個(ge) 細胞核，細胞內(nei) 部含有沿長軸平行排列的肌原纖維。肌原纖維由交替排列的明帶（I帶）和暗帶（A帶）組成，其中暗帶中有H線和M線，明帶中有Z線。兩(liang) 個(ge) Z線之間的區段被稱為(wei) 一個(ge) 肌節，肌節是骨骼肌纖維的基本功能單位。

原代小鼠骨骼肌細胞的培養(yang) 技術已非常成熟。通過對小鼠正常肌肉組織進行酶解消化，可高效分離出成肌細胞（myoblasts）。這些成肌細胞在適宜條件下融合形成多核的骨骼肌纖維。培養(yang) 初期（約3天），細胞逐步貼壁並展伸，呈現梭形、不規則形、三角形或扇形等多樣形態。核形多為(wei) 卵圓形且居中分布。培養(yang) 至兩(liang) 周後，細胞逐漸融合，纖維狀細胞沿特定方向平行排列，有時在局部區域出現多層堆疊。傳(chuan) 代培養(yang) 後，細胞增殖加快，通常在4-6天即可達到匯合。

小鼠原代骨骼肌細胞在生理和病理研究中扮演重要角色，尤其是在肌肉再生、損傷(shang) 修複等領域。由於(yu) 小鼠模型的遺傳(chuan) 學優(you) 勢，常被用於(yu) 基礎科研和藥物開發。標準化標記為(wei) SkMC（Skeletal Muscle Cells from Mouse）。

小鼠原代骨骼肌細胞特性特征

• 形態特征：小鼠骨骼肌細胞呈長柱形、不分支的纖維狀，具有明顯的橫紋結構。每個(ge) 細胞通常為(wei) 多核，細胞核位於(yu) 細胞膜下方，形態多樣，包括梭形、不規則形和三角形等。
  

• 肌原纖維結構：肌細胞內(nei) 部含有平行排列的肌原纖維，這些肌原纖維由相間的明帶（I帶）和暗帶（A帶）組成。明帶染色較淺，而暗帶染色較深，暗帶中有H線，H線中部有M線，Z線則標誌著肌節的邊界。

• 基因表達：小鼠骨骼肌細胞表達多種與(yu) 肌肉發育和功能相關(guan) 的基因，如肌球蛋白重鏈（MyHC）、肌動蛋白（Actin）、肌鈣蛋白（Troponin）等。這些基因在肌肉收縮和代謝過程中起著關(guan) 鍵作用。
  

• 幹細胞標記：成肌細胞通常表達一些幹細胞標記物，如Pax7、MyoD和Myf5，這些標記物在成肌細胞增殖和分化過程中發揮重要作用

小鼠原代骨骼肌細胞參數表

小鼠原代骨骼肌細胞培養教程

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出小鼠原代骨骼肌細胞的凍存管，迅速放入37℃水浴中解凍，輕輕搖動以加速解凍過程。
  

• 當骨骼肌細胞完全解凍後，立即加入4 mL含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yang) 基稀釋DMSO，輕輕混勻。
  

• 將細胞懸液轉移至15 mL離心管中，以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液以去除DMSO。
  

• 用1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸骨骼肌細胞，輕輕吹打使其均勻分散。
  

• 將重懸後的骨骼肌細胞轉移至T25培養(yang) 瓶中，加入8 mL新鮮培養(yang) 基，並置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。
  

• 第二天，檢查骨骼肌細胞密度，吸去舊培養(yang) 基並更換新鮮培養(yang) 基以去除殘留的DMSO和非貼壁細胞。

細胞傳代

• 當骨骼肌細胞的密度達到80%-90%時，準備進行傳(chuan) 代操作。
  

• 吸去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基，用PBS溶液輕柔洗滌骨骼肌細胞一次，以去除殘留培養(yang) 基成分。
  

• 加入1 mL 0.125%胰蛋白酶溶液至培養(yang) 瓶中，將其放入37℃培養(yang) 箱內(nei) 消化2-3分鍾，觀察骨骼肌細胞逐漸脫落。
  

• 當骨骼肌細胞大部分脫落後，加入等體(ti) 積的培養(yang) 基中和胰蛋白酶作用。
  

• 消化後的骨骼肌細胞轉入離心管，以400-1000 RPM離心5分鍾，棄去上清液後用新鮮培養(yang) 基重懸。
  

• 按細胞濃度為(wei) 0.5 × 10⁶ cells/mL，將骨骼肌細胞懸液接種至新T25培養(yang) 瓶中，並繼續在37℃、5% CO₂條件下培養(yang) 。

細胞凍存

• 配製冷凍液，常用配方為(wei) 60%基礎培養(yang) 基、30%胎牛血清、10%DMSO，或選用無血清凍存液。
  

• 選擇生長狀態良好的骨骼肌細胞，在對數生長期進行收集操作。離心去除上清液後，留下細胞沉澱。
  

• 用冷凍液將骨骼肌細胞重懸，濃度調節至1-5 × 10⁶ cells/mL。
  

• 將骨骼肌細胞懸液分裝至凍存管中，封口後置於(yu) -80℃冷凍盒中，降溫12-16小時。隨後，將凍存管迅速轉移至液氮中長期保存。