BHK-21細胞（倉(cang) 鼠腎成纖維細胞）[C-13]

BHK-21細胞 [C-13]（倉(cang) 鼠腎成纖維細胞）源自敘利亞(ya) 倉(cang) 鼠的正常腎組織，最初由I.A. Macpherson和M.G.P. Stoker於(yu) 1961年建立。BHK-21細胞係的親(qin) 本來源於(yu) 五隻未交配的1日齡幼倉(cang) 鼠，經過連續培養(yang) 84天，僅(jin) 在凍存保存8天時中斷。通過單細胞分離技術，成功獲得了第13號克隆（C-13），並發展為(wei) 具有穩定特性的細胞亞(ya) 係。

BHK-21細胞係具備優(you) 良的生長性能，廣泛應用於(yu) 病毒增殖、疫苗生產(chan) 及生物醫學研究，特別適合於(yu) 口蹄疫病毒、腦心肌炎病毒等病毒的增殖和純化。已被世界動物衛生組織（OIE）指定用於(yu) 狂犬病的常規診斷。

BHK-21細胞為(wei) 偽(wei) 二倍體(ti) ，主要核型為(wei) 44，XY，-6，-15，6q+，15q+，四倍體(ti) 發生率約為(wei) 4%。大多數細胞中觀察到6q+和15q+標記染色體(ti) ，但偶見正常染色體(ti) 單體(ti) 或三體(ti) 的變異情況。

BHK-21細胞特性特征

• 染色體(ti) 組型：2n=44，為(wei) 偽(wei) 二倍體(ti) 體(ti) 係，四倍體(ti) 發生率為(wei) 4%。
  

• 核型分析：大多數細胞的核型為(wei) 44, XY，且存在部分缺失（如-6, -15）和染色體(ti) 標記（如6q+和15q+）。

• BHK-21細胞對多種病毒具有良好的易感性，包括：人腺病毒25、呼腸孤病毒3、水皰性口炎病毒、人脊髓灰質炎病毒2型

• 基因表達：BHK-21細胞在不同培養(yang) 條件下表現出不同的基因表達特征。例如，在低血清培養(yang) 基中，細胞形態會(hui) 從(cong) 多邊形轉變為(wei) 延長形，並且可能出現細胞融合現象。此時，細胞會(hui) 表達肌肉特異性蛋白，如：Desmin、Titin、骨骼肌肌動蛋白；這些表達變化表明BHK-21細胞在某些條件下可能具有分化潛能。

• 轉染能力：BHK-21細胞被廣泛用作轉染宿主，逆轉錄酶陰性。可以用於(yu) 表達含有選擇和擴增標記的DNA載體(ti) 。

• BHK-21細胞係在免疫反應方麵相對較弱，逆轉錄酶陰性，使其在某些實驗中成為(wei) 優(you) 選的宿主

BHK-21細胞[C-13]參數表

BHK-21細胞倉鼠腎成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 將冷凍在液氮中的BHK21細胞管取出，立即放入38°C至40°C水浴中快速解凍（避免水進入管內(nei) 並輕輕搖動）。

• 將解凍後的細胞轉移至含40 mL MEM培養(yang) 基和20% FBS的150 mL錐形瓶中，輕輕混勻。

• 在37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中以110 rpm搖床培養(yang) 48小時，觀察BHK21細胞的複蘇情況。

細胞培養

• 使用含10% FBS的MEM培養(yang) 基調整BHK21細胞密度至5-7 × 10⁵個(ge) /mL。

• 將培養(yang) 瓶放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

• 每2天更換一次培養(yang) 基，使用同樣配方的新鮮培養(yang) 基。

單細胞懸浮製備

• 在複蘇後的第一代BHK21細胞中計數後，使用含10% FBS的無血清培養(yang) 基進行稀釋，製備單細胞懸液。

• 稀釋步驟：100 × 10⁴個(ge) /mL → 10 × 10⁴個(ge) /mL → 1 × 10⁴個(ge) /mL → 1 × 10³個(ge) /mL。

• 將1 × 10³個(ge) /mL的單細胞懸液吸取500 μL加入100 mL新鮮培養(yang) 基中，混合均勻。

• 使用12道移液器將混合液分配到96孔板中，每孔200 μL（確保每孔接種一個(ge) 細胞）。

• 在37℃、5% CO₂的條件下培養(yang) 2小時後，觀察各孔生長情況，標記出隻有一個(ge) 細胞的孔，並繼續培養(yang) 。

• 每天觀察並記錄BHK21細胞的生長情況，直到第7天挑選30株生長較快的單克隆細胞進行換液。

單克隆細胞擴大培養

• 當單克隆BHK21細胞在96孔板底部生長超過60%時進行擴大培養(yang) 。

• 按以下順序逐步傳(chuan) 代：從(cong) 96孔板轉移至24孔板，再轉移至T25、T75培養(yang) 瓶，最後轉移至150 mL錐形瓶。

• 每次傳(chuan) 代時，待BHK21細胞生長達到90%以上時，用移液器輕輕吹打以消化並轉移至下一級容器。

細胞凍存

• 當BHK21細胞達到所需密度（通常為(wei) 7.5 × 10⁶個(ge) /mL）時，可以進行凍存。

• 將BHK21細胞與(yu) 凍存液以1:1比例混合，並分裝至凍存管中。

• 將凍存管置於(yu) -80℃冰箱中過夜，然後轉移至液氮罐中保存。