大鼠真皮成纖維細胞（kaiyun网站安全）

原代大鼠真皮成纖維細胞（Rat Dermal Fibroblasts, RDF）源自大鼠真皮組織，是皮膚結締組織中的主要細胞類型，廣泛應用於(yu) 生物醫學研究，特別是在細胞和分子生物學領域。

成纖維細胞起源於(yu) 胚胎時期的間充質細胞，形態較大，多呈紡錘形或星形，具有清晰的輪廓和突起結構。細胞核規則，呈卵圓形，核仁明顯，細胞質略呈堿性，表明其在蛋白質合成和分泌方麵的活躍狀態。成纖維細胞不僅(jin) 能維持組織結構的完整性，還能合成細胞外基質，在組織損傷(shang) 修複中發揮關(guan) 鍵作用。在特定環境下，成纖維細胞可與(yu) 肌成纖維細胞相互轉化，適應不同的生理和病理需求。

原代大鼠真皮成纖維細胞通常通過組織塊培養(yang) 法或酶消化法分離。新鮮分離的細胞呈球形，具有良好的折光性，懸浮於(yu) 培養(yang) 基中。約30分鍾後，部分細胞開始貼壁並伸出偽(wei) 足，6小時內(nei) 基本貼壁完成，形態逐漸呈現梭形。培養(yang) 5-7天後，細胞達到融合狀態，排列緊密，部分細胞交叉生長，呈現均勻的網狀結構。隨著培養(yang) 時間的延長，細胞增殖迅速，胞體(ti) 透明，胞核清晰，整體(ti) 呈扁平分布。在生理條件下，大鼠真皮成纖維細胞的核心功能包括維持皮膚結構的穩定性、合成細胞外基質成分（如膠原蛋白、透明質酸）、促進組織修複及調節皮膚的生物力學特性。

大鼠真皮成纖維細胞特性特征

• 大鼠真皮成纖維細胞主要功能包括合成和分泌細胞外基質（ECM），如膠原蛋白和彈性蛋白，對組織的構造和維持正常形態至關(guan) 重要。

• 在組織損傷(shang) 後，大鼠真皮成纖維細胞能夠迅速聚集並參與(yu) 修複過程。

• 細胞質內(nei) 富含粗麵內(nei) 質網和高爾基複合體(ti) ，顯示出強大的蛋白質合成能力。

• 成纖維細胞表達多種與(yu) 膠原合成相關(guan) 的基因，如COL1A1（編碼I型膠原蛋白）和COL3A1（編碼III型膠原蛋白）。

• 在不同的生理或病理條件下，大鼠真皮成纖維細胞能夠通過轉化為(wei) 不同類型的細胞（如肌成纖維細胞）來適應環境變化。

大鼠真皮成纖維細胞參數表

原代大鼠真皮成纖維細胞培養教程

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存RDF細胞管，迅速置於(yu) 37°C水浴中，輕輕搖動以加速解凍（約1-2分鍾）
  

• 迅速將解凍的RDF細胞懸液轉移至含10%胎牛血清（FBS）和1%青鏈黴素的DMEM培養(yang) 基中，混勻以降低DMSO濃度

• 以200 g離心5分鍾，去除上清液。

• 以新鮮培養(yang) 基重懸RDF細胞，調整細胞濃度至1-2×10^6 cells/mL。

• 將RDF細胞接種至T25培養(yang) 瓶中，放入37°C、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 24小時後觀察RDF細胞貼壁情況，並根據需要更換培養(yang) 基。

細胞傳代

• RDF細胞融合度達80%-90%時進行傳(chuan) 代。

• 用PBS洗滌RDF細胞，去除殘留培養(yang) 基。

• 加入0.25%胰蛋白酶（Trypsin），於(yu) 37°C孵育2-5分鍾，觀察細胞開始脫落。

• 加入等體(ti) 積培養(yang) 基終止消化，並輕柔吹打混勻形成單細胞懸液。

• 以200 g離心5分鍾，棄去上清液。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸RDF細胞，調整細胞濃度至1-2×10^6 cells/mL。

• 以1:2-1:3比例將RDF細胞接種至新的培養(yang) 瓶中。

• 繼續於(yu) 37°C、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) ，定期更換培養(yang) 基。

細胞凍存

• 選擇處於(yu) 對數生長期、融合度達90%的RDF細胞進行凍存。

• 采用含10% DMSO和90% FBS的凍存液。

• 按照傳(chuan) 代步驟收集RDF細胞，離心（200 g，5分鍾）後棄去上清。

• 以凍存液重懸RDF細胞，調整濃度至1-5×10^6 cells/mL。

• 將RDF細胞懸液分裝至凍存管，標記信息。

• 采用-1°C/min降溫速率冷凍至-80°C。

• 24小時後轉入液氮長期保存。

質量控製與注意事項

• 通過Vimentin免疫熒光染色鑒定RDF細胞類型，確保純度達到90%以上。

• 細胞培養(yang) 期間，定期檢測支原體(ti) 、細菌、病毒汙染。

• 培養(yang) 基需定期更換，避免pH值變化過大。

• 細胞消化時間不宜過長，以防影響RDF細胞活性。

• 低傳(chuan) 代數RDF細胞增殖活性較高，建議使用P3-P6代細胞進行實驗。