
大鼠真皮微血管內(nei) 皮細胞(kaiyun网站安全)
- 來源:皮膚組織
- 細胞特征:貼壁 , 內(nei) 皮細胞樣
- 培養(yang) 基:kaiyun网站安全專(zhuan) 用培養(yang) 基
- 其他:真皮微血管內(nei) 皮細胞的體(ti) 外分離培養(yang) 技術困難
大鼠真皮微血管內(nei) 皮細胞分離自真皮組織。微血管內(nei) 皮細胞(MEC)在炎症反應、腫瘤生長和創麵愈合過程中起著非常重要的作用。真皮微血管內(nei) 皮細胞,由於(yu) 其體(ti) 外分離培養(yang) 技術困難,相關(guan) 研究受到了一定限製。
大鼠真皮微血管內皮細胞特性
大鼠真皮微血管內(nei) 皮細胞分離自真皮組織。
真皮位於(yu) 表皮深層,向下與(yu) 皮下組織相連,真皮結構包括膠原蛋白、彈性纖維以及基質。
真皮由乳頭層與(yu) 網狀層組成。
微血管內(nei) 皮細胞在炎症反應、腫瘤生長、創麵愈合等過程中有重要作用。
創麵愈合研究中,真皮微血管內(nei) 皮細胞的體(ti) 外分離培養(yang) 技術困難,限製了相關(guan) 研究。
原代大鼠真皮微血管內皮細胞參數表
產品名稱 | 大鼠真皮微血管內皮細胞(kaiyun网站安全) |
組織來源 | 真皮組織 |
產品規格 | 5×10^5 cells/T25 細胞培養瓶 |
細胞簡介 | 大鼠真皮微血管內皮細胞分離自真皮組織。 |
方法簡介 | 膠原酶-中性蛋白酶混合消化法結合密度梯度離心法,最後通過內(nei) 皮細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基培養(yang) 篩選製備。 細胞經CD31/vWF免疫熒光鑒定,純度可達90%以上。 |
包被條件 | PLL (0.1mg/ml), 明膠 (0.1%) |
培養基 | kaiyun网站安全專用培養基 |
換液頻率 | 每2-3天換液一次 |
生長特性 | 貼壁 |
細胞形態 | 內皮細胞樣 |
傳代特性 | 可傳2-3代 |
傳代比例 | 1:2 |
消化液 | 0.25% 胰蛋白酶 |
培養條件 | 氣相:空氣,95%;CO2,5%;37℃ |
抗原鑒定 | CD31/vWF |
生物安全等級 | 1 |
培養教程
大鼠真皮微血管內皮細胞培養
取出T25細胞培養(yang) 瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5% CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4小時,以穩定細胞狀態。
貼壁細胞消化
吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基,用PBS清洗細胞一次。
添加1mL 0.25%胰蛋白酶消化液至T25培養(yang) 瓶中,輕微轉動培養(yang) 瓶使消化液覆蓋整個(ge) 瓶底,吸出多餘(yu) 胰蛋白酶消化液,37℃溫浴1-3分鍾。待細胞回縮變圓後,加入5mL完全培養(yang) 基終止消化。
用吸管輕輕吹打混勻,按傳(chuan) 代比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代,補充新鮮的完全培養(yang) 基至5mL,置於(yu) 37℃、5% CO2、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。
待細胞完全貼壁後,培養(yang) 觀察,並按換液頻率更換新鮮培養(yang) 基。
細胞收貨脫落
收集所有細胞懸液,1000rpm離心5分鍾,保留沉澱。
添加0.5mL 0.25%胰蛋白酶消化液至離心管中,重懸沉澱,37℃消化3分鍾(或4℃冰箱靜置5-7分鍾),然後加入5mL完全培養(yang) 基終止消化。
1000rpm離心5分鍾,丟(diu) 棄上清,用5mL完全培養(yang) 基重懸沉澱,接種於(yu) 新的培養(yang) 瓶內(nei) 。
待細胞完全貼壁後,培養(yang) 觀察,按換液頻率更換新鮮培養(yang) 基。
細胞實驗
對於(yu) 貼壁的kaiyun网站安全,在消化後轉移至其他實驗器皿(如玻璃爬片、培養(yang) 板、共聚焦培養(yang) 皿等)時,需要對實驗器皿進行包被,以增強細胞貼壁性,避免細胞因沒貼好影響實驗。包被條件常選用鼠尾膠原I(2-5μg/cm²)、多聚賴氨酸(PLL,0.1mg/mL)、明膠(0.1%)等。
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參考文獻
- 《西北國防醫學雜誌》 1999年04期
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