小鼠原代真皮成纖維細胞（MDF細胞）

原代小鼠真皮成纖維細胞（Mouse Dermal Fibroblasts, MDF）是從(cong) 小鼠皮膚真皮組織中分離得到的重要細胞類型，廣泛用於(yu) 生物醫學研究。其前體(ti) 來源於(yu) 胚胎時期中胚層的間充質細胞，通過酶消化或機械分離技術獲得，常用實驗小鼠品係包括C57BL/6。剛分離的細胞在培養(yang) 基中呈圓形，折光性強，短時間內(nei) 完成貼壁，逐漸伸展為(wei) 梭形或星形；小鼠真皮成纖維細胞常用於(yu) 組織工程、創傷(shang) 修複、皮膚病理學和藥物研發中，特別是在創傷(shang) 修複研究中可評估新型材料或藥物的調節作用。

小鼠原代真皮成纖維細胞特性特征

• 基因表達：表達多種與(yu) 細胞外基質合成相關(guan) 的基因，如COL1A1（I型膠原蛋白）、COL3A1（III型膠原蛋白）和HAS2（透明質酸合成酶）等。

• 標誌物：通過免疫熒光鑒定，真皮成纖維細胞通常表達Vimentin，這是一種中間絲(si) 蛋白，是成纖維細胞的重要標誌物。此外，它們(men) 不應含有HIV-1、HBV、HCV等病原體(ti) 。

• 生長因子：在創傷(shang) 愈合過程中，原代真皮成纖維細胞能夠分泌多種生長因子，如轉化生長因子β（TGF-β）和血小板源生長因子（PDGF），促進周圍細胞的增殖和遷移

小鼠原代真皮成纖維細胞參數表

小鼠原代真皮成纖維細胞培養教程

MDF細胞複蘇

• 預熱37℃水浴槽和含10%胎牛血清的DMEM培養(yang) 基。
  

• 將0.2%明膠包被的培養(yang) 瓶準備好，置於(yu) 培養(yang) 箱中平衡溫度和氣體(ti) 環境。

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的MDF細胞凍存管，立即放入37℃水浴中，快速搖動使細胞解凍（約1-2分鍾）。
  

• 解凍後迅速用75%乙醇擦拭凍存管表麵，移至無菌操作台內(nei) 。

• 將細胞懸液轉移到15 mL離心管中，加入5倍體(ti) 積預熱的DMEM培養(yang) 基稀釋DMSO，400 g離心5分鍾，棄去上清液。

• 將細胞沉澱重懸於(yu) 1-2 mL培養(yang) 基中，接種到預包被的T25培養(yang) 瓶中，並補充培養(yang) 基至5 mL。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) ，6小時後更換新鮮培養(yang) 基去除殘餘(yu) DMSO。

MDF細胞傳代

• 傳(chuan) 代的細胞密度：當細胞融合度達到70%-80%時進行傳(chuan) 代。
  

• 消化液：使用0.25%胰酶-EDTA（預熱至37℃）。

• 掉舊培養(yang) 基，使用PBS輕柔清洗細胞1次以去除殘餘(yu) 血清和代謝廢物。
  

• 加入適量胰酶-EDTA溶液（約1 mL/25 cm²），37℃孵育約1-2分鍾，觀察顯微鏡下細胞變圓脫離。

• 加入等體(ti) 積含10%胎牛血清的培養(yang) 基終止消化，用吸管輕輕吹打使細胞分散。

• 將細胞懸液轉移至15 mL離心管中，400 g離心5分鍾，棄上清後重懸於(yu) 新鮮培養(yang) 基中。

• 按1:3的比例接種到新的培養(yang) 瓶中，並補充適量培養(yang) 基後置於(yu) 培養(yang) 箱繼續培養(yang) 。

• 消化時間不宜過長，以防止對MDF細胞造成損傷(shang) 。

• 每次傳(chuan) 代後應觀察細胞狀態，記錄貼壁時間及增殖速率，確保細胞保持良好活性。

MDF細胞凍存

• 收集處於(yu) 對數生長期的MDF細胞，按常規方法消化並離心收集細胞沉澱。
  

• 用預冷的凍存液將細胞重懸，細胞密度調整至1×10⁶~2×10⁶個(ge) /mL。

• 分裝細胞懸液到無菌凍存管中，每管1 mL。

• 將凍存管放入程序降溫盒中，-80℃保存過夜後轉移至液氮中長期儲(chu) 存。

• 凍存細胞時應確保凍存液與(yu) 細胞混勻，避免細胞結團。
  

• 液氮儲(chu) 存時確保液位充足，避免因溫度波動影響MDF細胞存活率。