
OK細胞係(負鼠腎細胞)
- 來源:正常;腎,皮質;近小管
- 細胞特征:貼壁細胞 , 上皮細胞樣
- 培養(yang) 基:MEM(含NEAA)+10% FBS+1% P/S
- 其他:OK細胞在培養(yang) 中多種表達吸收,包括α2起始素能吸收、心鈉素(ANP)、血清素及甲狀旁腺激素(PTH)吸收等
OK負鼠腎細胞(OK Opossum Kidney Cells)是一種從(cong) 成年雌性北美負鼠(Didelphis virginiana)的近端小管上皮細胞中分離的細胞係。最初建立OK細胞的目的是提供用於(yu) 研究X染色體(ti) 失活的細胞來源,但隨後發現其具備廣泛的生物學應用,尤其在腎近端小管上皮細胞相關(guan) 研究中表現出優(you) 良的培養(yang) 特性和實驗適用性。在培養(yang) 條件下,OK細胞顯示出多種重要受體(ti) 的表達特征,是研究這些受體(ti) 功能的理想模型。
OK細胞係特性特征
吸收表達:OK Cell在培養(yang) 中展示出多種吸收表達:α2抵抗力、心鈉素(ANP)受體(ti) 、血清素受體(ti) 、甲狀旁腺激素(PTH)受體(ti)
酶缺乏:與(yu) 其他腎小管細胞係相比,OK細胞缺乏一些特定的近端小管酶,這在某些研究中具有獨特的優(you) 勢。
基因表達:OK細胞能夠表達與(yu) 腎髒功能相關(guan) 的多個(ge) 基因,尤其是在研究腎髒多巴胺生理學方麵表現突出。
X染色體(ti) 研究:OK細胞係首次針對X染色體(ti) 失活的研究,提供了一個(ge) 理想的模型來探討X染色體(ti) 的功能和調控機製。
多巴胺能生理學:OK細胞增強產(chan) 生和退化多巴胺的能力,被廣泛用於(yu) 研究腎髒多巴胺能生理學。
OK細胞係參數表
細胞名稱 | OK細胞係(負鼠腎細胞)(Opossum Kidney Cells) |
細胞別稱 | Opossum Kidney; OK-WT;Didelphis virginiana(北美負鼠) |
組織來源 | 腎,主要為近端小管上皮細胞 |
細胞形態 | 上皮樣細胞,貼壁生長 |
細胞數量 | 每個凍存管中約含有100萬細胞(1 x 10^6 cells/vial/T25) |
培養基 | MEM(含 NEAA)+10% FBS+1% P/S |
培養條件 | 溫度:37°C;CO2濃度:5%;濕度:70%-80% |
pH值 | 7.2 - 7.4 |
傳代比例 | 1:4至1:6 |
細胞密度 | 達到80%-90%時進行 |
凍存成分 | 90%胎牛血清 + 10% DMSO |
無菌檢測 | 細菌、酵母、支原體陰性 |
病原檢查 | HIV、HBV、HCV均為陽性 |
代數範圍 | 2-4代 |
用途限製 | 科研科研使用,可用於臨床診斷和治療 |
生長特性 | 迅速發展,預見強,轉染效率高 |
特性 | α2引入素能吸收、心鈉素(ANP)、血清素、甲狀旁腺激素(PTH)吸收等 |
培養教程
OK負鼠腎細胞係培養教程
OK細胞複蘇
將凍存管中的OK細胞迅速置於(yu) 37°C水浴中,輕輕搖晃以加速解凍,直至完全融化。
解凍後,立即將OK細胞懸液加入4 mL預先準備好的培養(yang) 基中,以去除冷凍保護劑並輕輕混勻。
在1000 RPM下離心4分鍾,將OK細胞與(yu) 冷凍保護劑分離,棄去上清液。
補加1-2 mL培養(yang) 基重懸OK細胞,並輕輕吹勻,以確保OK細胞分散均勻。
將OK細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶或10 cm培養(yang) 皿中,並補充約8 mL培養(yang) 基。
將培養(yang) 皿置於(yu) 培養(yang) 箱中過夜培養(yang) ,次日檢查OK細胞的貼壁情況和生長狀態。
OK細胞傳代
當OK細胞密度達到80%-90%時,即可進行傳(chuan) 代。
棄去培養(yang) 基上清後,用不含鈣、鎂的PBS潤洗OK細胞1-2次,以去除殘留血清。
加入2 mL含0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA的消化液,在37°C培養(yang) 箱中消化1-2分鍾,觀察OK細胞是否變圓並脫落。
消化完成後,加入少量培養(yang) 基終止消化,輕敲培養(yang) 瓶底以幫助OK細胞從(cong) 瓶壁脫落。
將OK細胞用6-8 mL培養(yang) 基重懸,並在1000 RPM下離心4分鍾,棄去上清液。
根據實驗需求,將OK細胞按1:2至1:5的比例分配到新的培養(yang) 瓶或皿中,補加8 mL新鮮培養(yang) 基,繼續培養(yang) 。
OK細胞凍存
選擇生長狀態良好的OK細胞進行凍存。棄去培養(yang) 基後,用PBS清洗OK細胞1-2次。
加入1 mL胰蛋白酶,待OK細胞完全脫落後,補加2 mL完全培養(yang) 基終止消化。
在1000 RPM下離心5分鍾,去除上清液。
用含10% DMSO的胎牛血清作為(wei) 凍存液,將OK細胞重懸於(yu) 凍存液中,迅速混勻,以確保OK細胞均勻分布。
將OK細胞懸液分裝至凍存管,每管1 mL,並做好標簽標記。
將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中,首先在-80°C下保存至少2小時,然後轉入液氮罐中長期儲(chu) 存。
注意事項
收到OK細胞後,應檢查細胞瓶是否完好無損,若發現漏液或渾濁現象,請及時與(yu) 供應商聯係。
傳(chuan) 代時若OK細胞密度未達80%,應繼續培養(yang) 至合適密度再進行傳(chuan) 代。
操作過程中始終保持無菌操作,防止OK細胞培養(yang) 被汙染。