HRaSF-SV40人風濕性關(guan) 節炎滑膜成纖維細胞永生化 （暫不提供）

HRaSF-SV40細胞是通過從(cong) 風濕性關(guan) 節炎患者的滑膜組織中分離的原代滑膜成纖維細胞，經過慢病毒轉染引入SV40基因而建立的永生化細胞株。HRaSF-SV40細胞在適當的培養(yang) 條件下能夠穩定傳(chuan) 代超過20代。HRaSF-SV40細胞保持了其原代成纖維細胞的形態特征和貼壁生長的特性。

HRaSF-SV40人風濕性關節炎滑膜成纖維細胞特性

• HRaSF-SV40細胞表達CD90、CD105等間充質幹細胞相關(guan) 表麵抗原，這些標誌物在細胞的增殖和分化中起重要作用。
  

• HRaSF細胞中SV40基因的表達使其獲得了無限增殖的能力，SV40是一個(ge) 常用的永生化基因，能夠抑製細胞的衰老過程。
  

• HRaSF-SV40細胞能夠分泌多種促炎細胞因子，這些因子在類風濕關(guan) 節炎的病理過程中起著重要作用。
  

• HRaSF細胞在培養(yang) 過程中表現出較高的增殖能力，這與(yu) 其永生化特性密切相關(guan) 。
  

• 疾病模型：HRaSF-SV40細胞被廣泛應用於(yu) 類風濕關(guan) 節炎的研究，特別是在探討滑膜成纖維細胞在疾病進程中的作用

HRaSF-SV40成纖維細胞參數表

HRaSF-SV40人風濕性關節炎滑膜成纖維細胞永生化培養教程

細胞複蘇與初代培養

• 從(cong) 液氮中取出凍存管，並立即將其放入37°C水浴中，輕輕晃動至細胞完全融化。

• 將融化的HRaSF細胞懸液轉移至15 ml離心管中，加入5 ml預熱的完全培養(yang) 基。

• 以900 rpm離心3-5分鍾，棄去上清液。

• 用2 ml完全培養(yang) 基重懸細胞沉澱，並將其均勻接種於(yu) 預先塗布Matrigel的T25培養(yang) 瓶中。

• 向培養(yang) 瓶中加入10-12 ml完全培養(yang) 基，輕輕晃動以確保HRaSF細胞均勻分布。

• 將培養(yang) 瓶放置於(yu) 37°C、5% CO2、飽和濕度的培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

• 24小時後檢查細胞貼壁情況，如發現HRaSF細胞未完全貼壁，可輕拍培養(yang) 瓶以促進細胞貼壁。

• 每2-3天更換培養(yang) 基一次，直至HRaSF細胞達到80%匯合度。

常規傳代培養

• 吸去培養(yang) 基，用PBS輕輕衝(chong) 洗HRaSF細胞兩(liang) 次。

• 加入適量0.25%胰酶-EDTA溶液（約1 ml對於(yu) T25瓶），輕輕晃動培養(yang) 瓶以確保胰酶均勻覆蓋HRaSF細胞層。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化5-10分鍾。

• 觀察顯微鏡下HRaSF細胞間隙是否增大但未完全脫落時，立即加入2-3倍體(ti) 積的完全培養(yang) 基以終止消化。

• 使用移液槍輕輕吹打HRaSF細胞，使其充分分散。

• 將細胞懸液轉移至15 ml離心管中，進行900 rpm離心3-5分鍾。

• 棄去上清液，使用預熱的完全培養(yang) 基重懸HRaSF細胞。

• 根據需要的接種比，將HRaSF細胞均勻接種於(yu) 新的培養(yang) 瓶中（傳(chuan) 代比1:2至1:4）。

• 加入適量的完全培養(yang) 基，輕輕晃動培養(yang) 瓶以確保HRaSF細胞均勻分布。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO2的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

• 每2-3天更換培養(yang) 基一次，當HRaSF細胞達到80%匯合度時進行下一次傳(chuan) 代。

注意事項

• 胰酶的消化時間可能因品牌而異，需嚴(yan) 格控製以避免過度消化HRaSF細胞。

• 在傳(chuan) 代過程中，操作要盡量輕柔，以避免產(chan) 生氣泡和細胞損傷(shang) 。

• 使用推薦的完全培養(yang) 基，以確保HRaSF細胞的最佳生長狀態，避免生長緩慢或死亡。

• 對於(yu) 原代永生化的HRaSF細胞，建議盡早完成實驗，以確保細胞質量和實驗結果的可靠性。