大鼠滑膜成纖維細胞（kaiyun网站安全）

大鼠滑膜成纖維細胞（Rat Synovial Fibroblasts, RSyF）是從(cong) 大鼠滑膜組織中分離得到的貼壁細胞，具有成纖維細胞樣形態。

滑膜組織位於(yu) 關(guan) 節腔內(nei) 麵，是關(guan) 節囊內(nei) 層的一種疏鬆結締組織，由靠近關(guan) 節腔的細胞層（內(nei) 腔層）和富含血管的內(nei) 膜下層組成。滑膜是關(guan) 節的重要組成部分，其主要功能是分泌滑液，滑液中含有透明質酸、蛋白多糖和潤滑蛋白等成分，可減少關(guan) 節運動時的摩擦，保護軟骨組織，同時參與(yu) 關(guan) 節腔內(nei) 物質交換和代謝過程。滑膜細胞是滑膜組織的主要細胞群體(ti) ，嵌入在顆粒狀無定形基質中，按功能和形態分為(wei) A型（巨噬樣細胞）、B型（成纖維樣細胞）和C型（樹突細胞樣細胞）。其中，B型細胞是主要成分，具有快速增殖能力，參與(yu) 滑液成分的分泌，並在炎症和關(guan) 節退變中發揮關(guan) 鍵作用。

大鼠滑膜成纖維細胞廣泛用於(yu) 研究骨關(guan) 節炎和類風濕性關(guan) 節炎等疾病的發病機製，特別是滑膜炎症在疾病中的作用；在抗炎藥物和抗風濕藥物的研發中也是重要工具。

大鼠滑膜成纖維細胞特性特征

• 滑膜細胞類型： 滑膜包含多種細胞，包括A型（巨噬細胞樣）和B型（成纖維細胞樣）細胞. RSyF細胞屬於(yu) B型滑膜細胞，也稱為(wei) 成纖維細胞樣滑膜細胞（FLS）

• 產(chan) 生滑液成分： 與(yu) 關(guan) 節腔的吸收和血液/滑液交換有關(guan) .
  

• 參與(yu) 炎症反應： 能夠增生，不受支持物生長的限製，並分泌大量的效應分子來促進炎症和關(guan) 節損壞.

• 作為(wei) 效應因子： 構成自分泌和旁分泌網絡中的效應因子.

• Vimentin陽性： 免疫細胞化學鑒定顯示波形蛋白（Vimentin）表達呈陽性.
  

• CD68陰性： 免疫細胞化學鑒定顯示CD68表達為(wei) 陰性.

• 主要細胞類型： 是類風濕關(guan) 節炎（RA）炎性增生的滑膜中主要的細胞類型.

• 代謝變化： 在炎性因子微環境的刺激下，SF活化並分化為(wei) 侵襲性亞(ya) 型，侵蝕關(guan) 節軟骨和骨組織.

• 潛在應用：用於(yu) 研究骨關(guan) 節炎等關(guan) 節疾病的發病機製；評估抗風濕藥物及其作用機理、研究滑膜細胞的形態、結構和功能，及其在關(guan) 節病中的作用和影響

大鼠滑膜成纖維細胞參數表

原代大鼠滑膜成纖維細胞培養教程

RSyF細胞的複蘇

• 使用RSyF細胞專(zhuan) 用培養(yang) 基，如無專(zhuan) 用培養(yang) 基，可選用含高糖DMEM培養(yang) 基，補充10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素混合液。
  

• 將培養(yang) 基置於(yu) 37℃水浴中預熱備用。

• 從(cong) 液氮罐中取出RSyF細胞凍存管，迅速置於(yu) 37℃水浴中解凍，輕輕搖晃，整個(ge) 過程控製在1-2分鍾內(nei) 完成。
  

• 解凍後，迅速將細胞轉移至無菌操作台中，避免長時間暴露在室溫下。

• 將解凍後的RSyF細胞懸液轉移至含5 mL預熱完全培養(yang) 基的離心管中，以1000 rpm離心5分鍾。
  

• 離心後小心吸除上清液，保留細胞沉澱。

• 用1 mL完全培養(yang) 基輕輕重懸細胞，避免產(chan) 生氣泡。
  

• 將細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶，補充5 mL完全培養(yang) 基，確保RSyF細胞均勻分布。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。
  

• 24小時後更換培養(yang) 基，去除死細胞及殘餘(yu) 凍存液。之後每2-3天更換培養(yang) 基，定期觀察RSyF細胞的生長情況。

RSyF細胞的傳代

• 傳(chuan) 代所需材料包括胰蛋白酶（0.25%）、PBS緩衝(chong) 液、完全培養(yang) 基（含10% FBS）。
  

• 胰蛋白酶和PBS需提前預熱至37℃。

• 當RSyF細胞匯合度達到80%-90%時，開始傳(chuan) 代操作。
  

• 用PBS清洗細胞一次，去除殘餘(yu) 培養(yang) 基。

• 加入適量胰蛋白酶，使其覆蓋細胞單層，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-3分鍾，觀察細胞變圓、脫落。

• 加入2倍體(ti) 積完全培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打細胞懸液，確保細胞分散均勻。
  

• 將RSyF細胞懸液轉移至離心管中，以1000 rpm離心5分鍾，去除上清液。
  

• 用適量完全培養(yang) 基重懸細胞，調整密度至適合傳(chuan) 代的濃度。

• 按1:2或1:3的比例將RSyF細胞懸液分裝至新的培養(yang) 瓶中，補充適量培養(yang) 基。
  

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) ，直至細胞達到下一次傳(chuan) 代條件。

RSyF細胞的凍存

• 配製凍存液：基礎培養(yang) 基（如DMEM）: FBS : DMSO = 8:1:1。DMSO終濃度為(wei) 10%。
  

• 消化並收集對數生長期的RSyF細胞，離心後用凍存液重懸細胞沉澱，調整密度至1×10⁶ - 1×10⁷個(ge) /mL。

• 將細胞懸液分裝至凍存管，每管1 mL，做好標記（細胞名稱“RSyF細胞”、日期、批號等）。

• 使用程序降溫盒將凍存管置於(yu) -80℃冰箱中，緩慢降溫至-80℃（約1℃/分鍾），過夜保存。
  

• 第二天，將凍存管轉移至液氮罐中長期儲(chu) 存。