大鼠骨髓間充質幹細胞（kaiyun网站安全）

大鼠骨髓間充質幹細胞（簡稱BMSC細胞）是一種來源於(yu) 中胚層的成體(ti) 幹細胞，具有高度的自我更新能力和多向分化潛能，能夠分化為(wei) 骨、軟骨、肌肉、脂肪、神經等多種組織細胞，被廣泛應用於(yu) 細胞生物學研究、組織工程、細胞替代治療、基因治療及組織器官再造等領域。BMSC細胞主要從(cong) 骨髓中分離，骨髓作為(wei) 造血和免疫器官，分布於(yu) 長骨（如股骨、脛骨）和扁平骨（如髂骨）的骨髓腔及稀鬆骨質間，具有海綿狀結構。成年動物骨髓分為(wei) 紅骨髓和黃骨髓，紅骨髓可生成紅細胞、血小板和各種白細胞，承擔造血和免疫功能；隨著年齡增長，紅骨髓部分被脂肪細胞替代形成黃骨髓，僅(jin) 在某些扁平骨中保留紅骨髓。骨髓間充質幹細胞占骨髓有核細胞總數的比例極低，僅(jin) 為(wei) 0.001%-0.1%。BMSC細胞在治療衰老相關(guan) 疾病中表現出潛力，例如通過過表達TPP1改善老年大鼠BMSCs的衰老狀態，提高其治療缺血性心肌病的效果。

大鼠骨髓間充質幹細胞特性特征

• 多向分化潛能：具有多向分化潛能，在體(ti) 外誘導後可特異性染色顯示脂質沉澱和骨結節，表達脂肪細胞和成骨細胞特異基因.

• 自我複製能力：具有自我複製功能，能夠釋放多種祖細胞，再分化為(wei) 各種功能性的細胞，如肝細胞、骨細胞、脂肪細胞及內(nei) 胚層來源的細胞.

• 表麵標誌物：表麵分子CD29、CD44和CD90表達均高於(yu) 95%；而造血係幹細胞標記分子CD34和CD45表達低於(yu) 5%.

• 其他特征：骨髓間充質幹細胞還具有較高的增殖能力。在不同誘導條件下，可向中胚層細胞如脂肪細胞、成骨細胞、肌細胞等分化

大鼠骨髓間充質幹細胞參數表

原代大鼠骨髓間充質幹細胞培養教程

BMSC細胞複蘇

• 從(cong) 液氮罐中迅速取出凍存的BMSC細胞，確保細胞受凍時間最短。

• 立即將凍存管置於(yu) 37℃水浴鍋中快速解凍，輕輕搖晃，在1-2分鍾內(nei) 使細胞完全融化。

• 在無菌操作台內(nei) ，用移液器將BMSC細胞懸液轉移至15 mL離心管中，加入5 mL新鮮完全培養(yang) 基稀釋。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 加入5 mL新鮮培養(yang) 基重懸細胞，將BMSC細胞接種到一次性細胞培養(yang) 瓶（25 cm²）中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) ，並注意培養(yang) 基的pH穩定性。

• 每2天更換一次培養(yang) 液，觀察BMSC細胞貼壁生長情況。

BMSC細胞傳代

• 當BMSC細胞貼壁生長且細胞融合度達到80%-90%時，可進行傳(chuan) 代操作。

• 棄去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 液，使用無鈣鎂的PBS緩衝(chong) 液清洗細胞3次，去除殘餘(yu) 培養(yang) 基。

• 加入適量0.25%胰蛋白酶消化液，輕輕搖晃培養(yang) 瓶，同時在倒置顯微鏡下觀察細胞的變化。當BMSC細胞間連接消失、細胞呈遊離狀態時，迅速加入等量的完全培養(yang) 基終止消化。

• 將細胞懸液轉移至離心管中，以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸細胞，計數後按照一定比例（如1×10⁵細胞/mL）接種到新的培養(yang) 瓶中。

• 加入適量完全培養(yang) 基（如5 mL/25 cm²培養(yang) 瓶），置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

BMSC細胞凍存

• 選擇生長良好、處於(yu) 對數生長期的BMSC細胞進行凍存。凍存前24小時更換新鮮培養(yang) 基，確保細胞處於(yu) 良好狀態。

• 用0.25%胰蛋白酶消化細胞，將BMSC細胞消化至遊離狀態後，加入等量培養(yang) 基終止消化，收集細胞懸液至離心管中。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液，加入預冷的凍存液（血清:DMSO=9:1），輕輕吹打使BMSC細胞分散均勻。

• 調節細胞濃度為(wei) 5×10⁶~1×10⁷個(ge) /mL，將細胞懸液分裝至凍存管中，每管1 mL。

• 將凍存管密封，並貼上標記清晰的標簽（包括“BMSC細胞”種類、凍存日期等信息）。

• 將凍存管置於(yu) 4℃環境下預冷30分鍾，隨後轉移至-20℃冰箱4小時，再轉入-80℃冰箱中過夜。最終，將BMSC細胞轉移至液氮罐（-196℃）中長期保存。

BMSC細胞培養基

• 推薦使用專(zhuan) 用的完全培養(yang) 基（如含10%胎牛血清的DMEM培養(yang) 基），同時確保培養(yang) 環境為(wei) 37℃、5% CO₂，培養(yang) 基需每2-3天更換一次。