牙髓間充質幹細胞 （原代人牙髓幹細胞）

牙髓幹細胞（DPSCs）來源於(yu) 人體(ti) 牙齒內(nei) 部的牙髓組織的成纖維狀細胞。人牙髓幹細胞與(yu) 骨髓間充質幹細胞（MSC）非常相似，在2000年Gronthos等人的研究中首次被發現。DPSCs不僅(jin) 能夠自我更新，還具有多向分化的能力，可轉變為(wei) 硬骨、脂肪、軟骨、肌肉和神經等多種細胞類型。

除了DPSCs外，牙齒中還存在其他類型的幹細胞，如SHED、SCAP和牙周幹細胞，它們(men) 共同展現了牙齒作為(wei) 幹細胞庫的潛力。這種潛力催生了乳牙銀行的出現，用於(yu) 保存脫落的乳牙，並提取其中的DPSCs以備將來可能的應用。

牙髓組織位於(yu) 牙齒內(nei) 部的牙髓腔內(nei) ，與(yu) 神經、血管、淋巴和結締組織相伴。其內(nei) 的造牙本質細胞負責牙本質的形成。由於(yu) 受到不同病源刺激物的作用，牙髓可能出現不同的病理變化，表現為(wei) 一係列不同的臨(lin) 床症狀和體(ti) 征，包括急性牙髓炎症。

牙髓間充質幹細胞特性

• 牙髓幹細胞（DPSCs）是位於(yu) 牙齒內(nei) 部牙髓組織中的一種成纖維狀細胞，與(yu) 骨髓間充質幹細胞（MSC）相似。

• DPSCs可自我更新和多向分化，能分化為(wei) 硬骨、脂肪、軟骨、肌肉和神經等細胞類型。

• 除了DPSCs外，牙齒中還發現了其他幹細胞類型，如SHED、SCAP和牙周幹細胞。

• DPSCs可從(cong) 脫落的乳牙和拔除的智齒中提取。

• 牙髓組織位於(yu) 牙齒內(nei) 部的牙髓腔內(nei) ，主要包含神經、血管、淋巴和結締組織，以及造牙本質細胞。

牙髓間充質幹細胞DPSCs參數表

牙髓幹細胞牙髓間充質幹細胞(DPSCs)的分離、傳代和培養

材料和試劑

• 牛磷酸鹽緩衝(chong) 鹽水(DPBS)、DMEM/F12培養(yang) 基、胎牛血清(FBS)+L、穀氨酰胺(L-Glutamine)、非必須性氨基酸(NEAA)、雙抗(抗生素/抗菌素)、胰酶-EDTA、凍存液、無菌手術器具和培養(yang) 皿；

分離培養步驟：

• 將新鮮采集的牙髓置於(yu) 10cm培養(yang) 皿中，用DPBS清洗3遍，避免汙染。

• 加入5ml完全培養(yang) 基(配置：DMEM/F12 + 20% FBS + 1% L-Glutamine + 1% NEAA + 1% 雙抗)浸潤牙髓組織，並用無菌手術剪將其剪碎。

• 將剪碎的組織塊固定在培養(yang) 皿中，於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱孵育30min，使其黏附在培養(yang) 皿壁上。

• 將固定的組織塊接種於(yu) 6cm培養(yang) 皿中，加入2ml完全培養(yang) 基。

• 每48小時更換1次完全培養(yang) 基，直到細胞從(cong) 組織塊中爬出。

• 細胞達到80%~90%後，使用胰酶-EDTA按1:3比例進行傳(chuan) 代。

傳代和培養步驟：

• 棄去培養(yang) 皿中的培養(yang) 基，輕輕用DPBS衝(chong) 洗1次。

• 加入適量胰酶-EDTA，於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中作用2~3分鍾，直到細胞完全脫落。

• 加入完全培養(yang) 基，混勻後離心，去除上清。

• 重新懸浮細胞，並按1:31:4的比例進行傳(chuan) 代，或以36*10^4個(ge) /ml的細胞密度接種至培養(yang) 器皿中。

• 每2天更換1次培養(yang) 基，直到細胞達到80%的融合度。

• 參照分離培養(yang) 步驟1~3，收獲細胞。

• 如需凍存，懸浮細胞於(yu) 凍存液中後放置於(yu) -80℃冰箱24小時，轉入液氮罐凍存。