
Plat-e細胞係(人逆轉錄病毒包裝細胞係)
- 來源:腎
- 細胞特征:貼壁細胞 ,上皮細胞樣
- 培養(yang) 基:90%DMEM+10% FBS+1% P/S
- 其他:Plat-e細胞隻能容易地感染小鼠或大鼠細胞注:鉑逆轉錄病毒包裝細胞。
Plat-E細胞係是一種由HEK-293T細胞改良而來的高效人源逆轉錄病毒包裝細胞,廣泛應用於(yu) 基因治療和病毒載體(ti) 的生產(chan) 。Plat-E細胞係具備高度穩定性和瞬時轉染的高效性,能夠產(chan) 生10^6至10^7感染單位/毫升的逆轉錄病毒,並且在藥物選擇的條件下可持續生產(chan) 病毒長達4個(ge) 月。
Plat-E細胞源自人胚腎細胞(HEK,Human Embryonic Kidney),具體(ti) 為(wei) 293T細胞的改造版本,293T細胞具有優(you) 良的生長特性和轉染效率,因而被廣泛用於(yu) 生物醫學研究。Plat-E細胞係優(you) 化的包裝載體(ti) 確保了病毒結構蛋白的高效表達,使其成為(wei) 基因治療和相關(guan) 研究中的理想選擇。
Plat-e細胞係特性特征
平均滴度:可達到106-107感染單位/毫升。
穩定性:Plat-E細胞在藥物選擇存在下,能夠持續產(chan) 生親(qin) 生態逆轉錄病毒,最長可達4個(ge) 月。
病毒結構蛋白:Plat-E細胞係通過表達MMLV(Moloney Murine Leukemia Virus)Gag和Pol蛋白,確保病毒顆粒的有效包裝。
包膜蛋白:Plat-E細胞係產(chan) 生的病毒隻能感染小鼠或大鼠細胞,因其表達單嗜性的包膜蛋白。
基因表達:Plat-E細胞係中插入了gag、pol和env基因,這些基因通過內(nei) 部核糖體(ti) 進入位點(IRES)序列連接,以提高表達效率。
兼容性:Plat-E細胞與(yu) 多種基於(yu) MMLV的表達載體(ti) (如pBABE和pMX)兼容,適合多種實驗設計。
Plat-E細胞係廣泛應用於(yu) :逆轉錄病毒的快速生成和穩定生產(chan) 、基因功能研究和基因治療相關(guan) 實驗
Plat-e細胞係參數表
細胞名稱 | Plat-E逆轉錄病毒包裝細胞係 |
別稱 | Plat-E;Platinum-E |
來源 | 人胚腎細胞(HEK293T) |
組織來源 | 胚胎,腎髒 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
生長特性 | 貼壁生長 |
生物安全等級 | BSL-1 |
支原體檢測 | 暫無數據 |
培養基 | DMEM高糖 + 10% FBS + 1% P/S |
培養條件 | 氣相:95%空氣,5%二氧化碳;溫度:37℃ |
換液頻率 | 每2-3天 |
傳代周期 | 每2-4天 |
傳代比例 | 1:3至1:15 |
凍存液配方 | 70%基礎培養基 + 20% FBS + 10% DMSO |
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
平均滴度 | 1 × 10^7感染單位/毫升 |
穩定性 | 在藥物選擇下可持續生產4個月 |
表達特征 | 表達MMLV-Gag-Pol和親嗜性包膜蛋白 |
兼容性 | 與基於MMLV的表達載體(如pBABE和pMX)兼容 |
感染特性 | 僅能感染小鼠或大鼠細胞 |
應用領域 | 基因治療、病毒載體生產 |
培養教程
Plat-e人逆轉錄病毒包裝細胞係培養教程
細胞複蘇
從(cong) 液氮中取出凍存的Plate細胞,將凍存管迅速放入37℃水浴中,保持凍存管上部不接觸水麵,輕輕搖晃,約1-2分鍾解凍。解凍後迅速轉移到無菌環境下,加入4 mL預熱至37℃的完全培養(yang) 基(DMEM + 10% FBS + 1% P/S),輕輕混勻。
將Plate細胞懸液轉移至離心管中,以1000 rpm離心3分鍾,棄去上清液。
加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基輕輕吹打懸浮Plate細胞。隨後,將細胞懸液轉移至含有預熱培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中,並置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。
Plate細胞貼壁後,第二天觀察細胞狀態,及時更換新鮮培養(yang) 基。
細胞傳代
準備傳(chuan) 代:當Plate細胞達到80%-90%匯合度時,棄去培養(yang) 上清液,並用無鈣鎂離子的PBS衝(chong) 洗細胞1-2次。
加入1 mL胰酶消化液(0.25%胰蛋白酶 + 0.53 mM EDTA),覆蓋細胞表麵,隨後迅速棄去多餘(yu) 消化液。將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中消化1分鍾。
通過顯微鏡觀察Plate細胞形態,當細胞大部分變圓並開始脫落時,輕輕敲擊培養(yang) 瓶幫助細胞脫離瓶壁。加入少量預熱的完全培養(yang) 基終止消化。
將Plate細胞懸液轉移至離心管中,1000 rpm離心4分鍾,棄去上清液。加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基輕輕混勻。
將Plate細胞懸液按照1:2的比例分到新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中,加入8 mL新鮮培養(yang) 基,繼續培養(yang) 。
細胞凍存
選擇健康生長的Plate細胞,棄去培養(yang) 基,使用PBS衝(chong) 洗一次。將Plate細胞收集後,1000 rpm離心4分鍾,棄去上清液。
用無血清凍存液將Plate細胞重懸,並調整細胞密度至5×10^6至1×10^7/mL。輕輕混勻細胞懸液,每支凍存管中加入1 mL細胞懸液,標記清楚。
將裝有Plate細胞的凍存管放入程序降溫盒中,置於(yu) -80℃冷凍24小時後,轉入液氮中長期保存。
注意事項
收到Plate細胞後,首先檢查細胞瓶是否完好,培養(yang) 基是否出現漏液或混濁現象,若發現問題,請及時聯係供應商。
在轉移Plate細胞至無菌環境前,使用75%酒精消毒細胞瓶表麵,並在顯微鏡下檢查細胞狀態。若有異常情況,請做好記錄並與(yu) 技術支持聯係。
收到的Plate細胞運輸培養(yang) 基僅(jin) 用於(yu) 運輸,不適合細胞長期培養(yang) 。請用新鮮配製的完全培養(yang) 基進行培養(yang) 。
傳(chuan) 代時應根據Plate細胞的密度及瓶皿大小選擇合適的比例。例如,1:2的傳(chuan) 代是將一個(ge) T25培養(yang) 瓶的細胞傳(chuan) 至兩(liang) 個(ge) T25瓶或兩(liang) 個(ge) 6 cm皿中。
Plate細胞僅(jin) 限於(yu) 科研用途,禁止用於(yu) 臨(lin) 床診斷或治療。
相關資料
- 解析HEK293衍生細胞係:從轉染效率到蛋白表達的全麵介紹
- HEK293細胞係的衍生品包括了多種類型,每種類型都具有特定的特點和應用。以下是一些常見的...
- 永生化支氣管上皮細胞
- 由於正常和患病原代支氣管上皮細胞對數量有限、供體之間存在顯著差異以及其有限的增殖能力,正常...
- 探究HK-2細胞形態異常的原因及調整策略
- 問:我在培養HK2人腎皮質細胞時,為什麽會出現空泡?答:出現空泡可能有兩種情況。如果細胞的...
- 查看完整內容 >
STR鑒定及相關
參考文獻
上一篇:HKb20細胞(人腎上皮細胞)
下一篇:ProPakA.6人胚腎細胞