HK-2 人腎皮質近曲小管上皮細胞

HK-2人腎皮質近曲小管上皮細胞來源於(yu) 正常成年男性腎髒近端腎小管細胞係。用人乳頭狀瘤病毒16（HPV-16）E6/E7基因轉導使細胞永生化。

HK-2人腎小管細胞源自正常的人體(ti) 腎髒近曲小管細胞。1994年，MJ Ryan等人首次建立了HK-2細胞係，通過將正常腎髒的近端腎小管上皮細胞暴露於(yu) 含有HPV-16 E6/E7基因的重組逆轉錄病毒中，使細胞獲得永生化能力。具體(ti) 地，研究人員首先將含有HPV-16 E6/E7基因的重組逆轉錄病毒載體(ti) pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2，然後利用Psi-2細胞產(chan) 生的病毒感染兼嗜性包裝細胞係PA317，最終將PA317細胞產(chan) 生的病毒顆粒導入正常的腎皮質近曲小管細胞。盡管細胞係中含有新黴素抗性基因，但並未通過G418篩選轉導克隆。後續的Southern和FISH分析顯示，HK-2細胞來源於(yu) 單克隆。

基於(yu) Southern和FISH分析，HK-2人腎小管細胞來源於(yu) 單個(ge) 細胞。通過PCR測定，HK-2基因組中有E6/E7基因。該細胞係可應用於(yu) 毒理學研究。

HK-2 人腎皮質近曲小管上皮細胞產品參數表

HK2人腎皮質細胞特性與功能

HK-2細胞在形態上呈現典型的上皮細胞樣式，並且是貼壁生長的細胞係。該細胞係具有多種細胞特性和功能特性：

• HK-2細胞保留了良好的近端腎小管細胞表型，表現出糖轉運、Na+依賴性/ phlorizin敏感糖轉運和腺苷酸環化酶對甲狀旁腺的反應性等功能特性。但對抗利尿激素的反應性較低。

• 在生物標誌物方麵，HK-2細胞陽性表達堿性磷酸酶、γ-穀氨酰轉肽酶、亮氨酸氨肽酶、酸性磷酸酶、細胞角蛋白、α3β1整合素和纖維連接蛋白。而因子VIII相關(guan) 抗原、6.19抗原和CALLA內(nei) 肽酶等標誌物則為(wei) 陰性。

• PCR檢測證實HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。

• 細胞具有貼壁依賴性，不會(hui) 在甲基纖維素、軟瓊脂或懸浮液中生長。

HK2人腎小管細胞應用領域

HK-2細胞在科學研究中被廣泛應用，主要包括但不限於(yu) ：

• 腎髒相關(guan) 疾病的研究：HK-2細胞作為(wei) 模型細胞係，用於(yu) 探究腎髒疾病的發病機製、新藥篩選及藥物毒性評價(jia) 等方麵。

• 藥物篩選：該細胞係可用於(yu) 評估藥物對腎髒細胞的影響，為(wei) 藥物研發提供重要參考。

• 毒理學研究：HK-2細胞可用於(yu) 評估化合物對腎髒細胞的毒性，為(wei) 毒理學研究提供可靠的細胞模型。

HK2人腎皮質細胞（HK-2 Renal Cortical Cells）培養步驟

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮罐中取出要複蘇的HK2人腎皮質細胞凍存管，迅速置於(yu) 37°C水浴鍋中，輕微搖晃使細胞凍存管中的培養(yang) 液快速融化，最好在1分鍾內(nei) 完成。

• 加入9 mL完全培養(yang) 基離心1,000rpm，5分鍾，小心取出細胞凍存管。

• 棄去上清溶液，加入1 mL完全培養(yang) 基（90% DMEM/F12+10% FBS），用移液器將HK2人腎皮質細胞吹成單個(ge) 細胞懸液，輕柔吹打，將細胞懸液移至無菌細胞培養(yang) 皿中，加入適量完全培養(yang) 基，置於(yu) 37°C、5% CO2細胞培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞傳(chuan) 代

• 在顯微鏡下觀察HK2人腎皮質細胞的密度，細胞長至80%以上可以考慮傳(chuan) 代，如細胞較稀，請及時換液。

• 用移液槍吸棄去細胞培養(yang) 皿中的舊培養(yang) 基，使用預熱至37°C的PBS溶液洗滌細胞兩(liang) 次並棄去，消除血清對後續胰酶的中和作用的影響。

• 加入1-2 mL的胰酶消化細胞，輕微搖晃細胞培養(yang) 皿，使胰酶完全浸潤HK2人腎皮質細胞表麵，在顯微鏡下觀察細胞。待細胞回縮變圓、細胞間隙增大後，棄去胰酶，加入1-2 mL完全培養(yang) 基終止消化，將細胞從(cong) 培養(yang) 皿表麵吹下，輕柔吹打細胞形成單個(ge) 細胞懸液並離心，新鮮培養(yang) 基重懸後將細胞懸液混勻後分狀至新的細胞培養(yang) 皿，並加入適量完全培養(yang) 基繼續培養(yang) 。

細胞凍存

• 事先配好細胞凍存液。

• 將處於(yu) 對數期生長的HK2人腎皮質細胞按照細胞傳(chuan) 代步驟進行消化，將細胞吹打成單個(ge) 細胞懸液後，收集細胞至15 mL離心管中，1,000rpm離心5分鍾，棄去上清，加入細胞凍存液，使用移液器吹吸混勻後，加入無菌細胞凍存管中。

• 在凍存管上標注HK2人腎皮質細胞的名稱及凍存時間後，4°C放置0.5小時，-20°C放置0.5小時，-80°C過夜後，置於(yu) 液氮罐中長期保存，注意做好標記。