大鼠原代腎小管上皮細胞

大鼠原代腎小管上皮細胞（Rat Primary Renal Tubular Epithelial Cells, RTECs）是從(cong) 健康大鼠的腎組織中提取，主要來源於(yu) 腎小管這一細長的上皮性結構，包含近端小管、髓袢和遠端小管，各部分在結構和功能上有所不同。近端小管負責重吸收葡萄糖和氨基酸，遠端小管則參與(yu) 電解質和酸堿平衡的調節。

腎小管上皮細胞在重吸收原尿中的營養(yang) 物質和排泄非營養(yang) 性物質方麵發揮關(guan) 鍵作用，還能分泌炎症介質（如細胞因子、趨化因子），參與(yu) 腎髒免疫反應，表達IL-2受體(ti) 和MHC II類分子，涉及腎免疫損傷(shang) 的發生。大鼠原代腎小管上皮細胞廣泛用於(yu) 腎髒疾病機製研究、藥物篩選和毒理學研究，是研究腎間質纖維化及其他腎髒病變的重要體(ti) 外模型。

大鼠原代腎小管上皮細胞特性特征

腎小管上皮細胞表達多種上皮細胞特異性標誌物：

• 角蛋白（CK-18）：用於(yu) 確認其上皮細胞身份。

• Na⁺/K⁺-ATP酶：參與(yu) 電解質的重吸收。

• 水通道蛋白（AQP1）：在水的重吸收中起重要作用。

表達與腎功能相關的基因，如：

• SGLT2：負責葡萄糖的重吸收。

• NHE3：參與(yu) 鈉離子的重吸收。

• ACE（血管緊張素轉化酶）：與(yu) 腎髒內(nei) 分泌功能相關(guan) 。

表達特征

• 重吸收功能：大鼠原代腎小管細胞能夠重吸收原尿中的幾乎全部葡萄糖和氨基酸，顯示出其在維持體(ti) 內(nei) 代謝平衡中的重要作用。

• 排泄功能：腎小管上皮細胞能夠排泄非營養(yang) 物質進入終尿，例如尿素和肌酐等廢物。

• 炎症介質分泌：腎小管細胞能分泌多種炎症介質，如細胞因子和趨化因子（例如IL-8），參與(yu) 急性炎症反應，並在腎免疫損傷(shang) 中發揮作用。

• 應對環境變化：腎小管上皮細胞對缺血、感染和毒物等環境變化敏感，能夠通過調節相關(guan) 基因的表達來適應不同的生理狀態

大鼠原代腎小管上皮細胞參數表

大鼠原代腎小管上皮細胞培養教程

收到原代腎小管上皮細胞後的處理

• 收到原代腎小管上皮細胞時，檢查培養(yang) 瓶的密封性、培養(yang) 液是否渾濁或漏液。
  

• 若是凍存的原代腎小管上皮細胞，需確認幹冰是否完全揮發，凍存管是否破損，以保證細胞的存活率。

• 活細胞：收到T-25培養(yang) 瓶中的原代腎小管上皮細胞後，用75%酒精消毒瓶表麵，放入培養(yang) 箱靜置2-3小時。
  

• 凍存細胞：如為(wei) 凍存的原代腎小管上皮細胞，需盡快轉入液氮或-80℃冰箱中保存，準備進行複蘇操作。

原代腎小管上皮細胞的複蘇

• 配製適合原代腎小管上皮細胞生長的完全培養(yang) 基，包括基礎培養(yang) 基（如DMEM/F12）、10%胎牛血清（FBS）和1%雙抗。
  

• 預熱培養(yang) 基：在37℃水浴中預熱5 ml完全培養(yang) 基。
  

• 化凍細胞：快速從(cong) 液氮或-80℃冰箱取出凍存的原代腎小管上皮細胞，放入37℃水浴中搖晃約1分鍾至完全化凍。

• 離心：將化凍的原代腎小管上皮細胞懸液加入5 ml預熱培養(yang) 基中，置於(yu) 15 ml離心管中，1000 rpm離心5分鍾。

• 重懸細胞：棄去上清，用2 ml完全培養(yang) 基重懸原代腎小管上皮細胞，將其接種於(yu) T-25培養(yang) 瓶中培養(yang) 。

• 細胞培養(yang) ：將原代腎小管上皮細胞放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) ，24小時後更換新鮮培養(yang) 基。

原代腎小管上皮細胞的傳代

• 當原代腎小管上皮細胞生長至80%-90%匯合時，可以進行傳(chuan) 代。
  

• 吸棄舊的培養(yang) 基，用1 ml無菌PBS輕柔地洗滌原代腎小管上皮細胞。
  

• 加入1 ml 0.25%胰酶，在37℃孵育1-2分鍾，觀察原代腎小管上皮細胞變圓後，加入1 ml完全培養(yang) 基終止消化。

• 輕輕拍打瓶壁使細胞脫落，形成均勻的細胞懸液。

• 收集懸液至離心管中，1000 rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 將沉澱的原代腎小管上皮細胞重懸於(yu) 適量完全培養(yang) 基中，分成新培養(yang) 瓶繼續培養(yang) 。

原代腎小管上皮細胞的凍存

• 按傳(chuan) 代方法收集原代腎小管上皮細胞，並計數。
  

• 配製冷凍保護液（90% FBS + 10% DMSO），以保護原代腎小管上皮細胞在凍存過程中不受損傷(shang) 。

• 將原代腎小管上皮細胞懸浮於(yu) 冷凍保護液中，分裝於(yu) 凍存管中，每管約1-5×10⁶ cells/ml。

• 置於(yu) -80℃冰箱中逐漸降溫，然後轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• 無菌操作：培養(yang) 原代腎小管上皮細胞時，需在生物安全櫃中進行，確保無菌。

• 培養(yang) 基更換：及時更換原代腎小管上皮細胞的培養(yang) 基，每2-3天更換一次，以保持良好狀態。

• 傳(chuan) 代頻率：根據原代腎小管上皮細胞的生長速度合理安排傳(chuan) 代，避免過度消化和稀釋。