原代大鼠表皮角化細胞

大鼠表皮角化細胞（Rat Epidermal Keratinocytes, 簡稱REK）是從(cong) 大鼠皮膚組織的表皮層中提取的kaiyun网站安全，廣泛應用於(yu) 生物醫學和臨(lin) 床研究領域。

大鼠表皮角化細胞通常通過皮膚表皮層的酶解法分離獲得。分離過程常使用中性蛋白酶及胰蛋白酶-膠原酶混合酶溶液，以確保角化細胞的活性和純度。大鼠表皮角化細胞在體(ti) 外培養(yang) 環境中能夠模擬體(ti) 內(nei) 的生理特性，有助於(yu) 研究創傷(shang) 愈合、皮膚屏障功能及皮膚疾病的相關(guan) 機製。

在細胞增殖和分化過程中，大鼠表皮角化細胞的分裂活性集中在基底層，部分在棘層中也存在活性。隨著這些細胞逐漸向表層遷移，其增殖能力逐漸喪(sang) 失，但分化程度增加。

原代大鼠表皮角化細胞特性特征

• 角質素（Keratin）是表皮角化細胞的重要標誌物。主要有：K5：主要表達於(yu) 基底層細胞，是未分化狀態的標誌；K10：主要表達於(yu) 角化的表皮細胞，是分化狀態的標誌。

• 基因表達：表皮角化細胞在不同階段表達不同的基因。例如，在分化過程中，K5的表達量會(hui) 增加，而K10的表達量則會(hui) 降低。這種變化反映了細胞從(cong) 未分化到分化的過程。

• 信號通路：研究表明，某些因子（如CCN1）能夠通過激活Wnt/β-Catenin信號通路促進角化細胞的增殖和去分化。這些信號通路在調控表皮發育和修複過程中起著重要作用

原代大鼠表皮角化細胞參數表

原代大鼠表皮角化細胞培養教程

大鼠表皮角化細胞複蘇

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的大鼠表皮角化細胞管，穿戴防護設備（如防爆管麵具）。
  

• 將大鼠表皮角化細胞的凍存管迅速放入37℃水浴中解凍，期間輕輕晃動凍存管，直至管內(nei) 無冰晶。

• 用75%的酒精徹底擦拭凍存管外表，以防汙染物進入大鼠表皮角化細胞的培養(yang) 環境。
  

• 打開凍存管，將大鼠表皮角化細胞懸液轉移至15ml離心管中，加入5ml完全培養(yang) 基。
  

• 以1000rpm離心5分鍾，棄去上清液。
  

• 用5ml新鮮完全培養(yang) 基重懸大鼠表皮角化細胞，將懸液轉移至25cm²培養(yang) 瓶中。

• 將培養(yang) 瓶置入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中靜置培養(yang) ，並於(yu) 次日更換新鮮完全培養(yang) 基，以去除冷凍保護劑。
  

大鼠表皮角化細胞傳代

• 當大鼠表皮角化細胞覆蓋培養(yang) 瓶80%左右時，準備進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去舊培養(yang) 基，並用無鈣鎂的PBS溶液清洗大鼠表皮角化細胞一次，以去除殘餘(yu) 培養(yang) 基和廢物。
  

• 加入約1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，輕輕搖晃培養(yang) 瓶使酶液均勻覆蓋細胞層。
  

• 37℃下消化1-3分鍾，待大鼠表皮角化細胞逐漸回縮、變圓並脫落。

• 加入完全培養(yang) 基終止胰酶反應。用移液器輕輕吹打大鼠表皮角化細胞懸液，並轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5分鍾。
  

• 棄去上清後，用新鮮完全培養(yang) 基重懸大鼠表皮角化細胞，按1:2的比例分裝至新的25cm²培養(yang) 瓶中。
  

• 將分瓶後的大鼠表皮角化細胞放入培養(yang) 箱繼續培養(yang) ，待細胞貼壁後按每2-3天更換培養(yang) 基。

大鼠表皮角化細胞培養注意事項

• 無菌操作：整個(ge) 大鼠表皮角化細胞培養(yang) 過程應嚴(yan) 格無菌操作，以防汙染。

• 胰酶消化時間控製：消化時間不宜過長，以防影響大鼠表皮角化細胞的貼壁性和增殖能力。

• 培養(yang) 基儲(chu) 存與(yu) 處理：完全培養(yang) 基在4℃保存，避免反複凍融，通常保存3-6個(ge) 月。

• 培養(yang) 基換液與(yu) 細胞監控：定期觀察大鼠表皮角化細胞形態和生長狀態。如發現異常，及時處理。

• 貼壁增強措施：建議傳(chuan) 代時使用鼠尾膠原Ⅰ或其他包被材料，提升大鼠表皮角化細胞貼壁性和生長穩定性。