原代小鼠表皮角化細胞

小鼠表皮角質形成細胞來源於(yu) 皮膚組織，具有合成角質蛋白的功能。

角質形成細胞是表皮的主要細胞成分，起始於(yu) 表皮深層並逐漸增殖、分化。在角化過程中，角質形成細胞的細胞核和細胞器會(hui) 完全消失，細胞失去生理功能並最終脫落。

小鼠表皮角質形成細胞特征

• 表皮位於(yu) 動物皮膚的外層，由胚胎時期外胚層形成，具有抗摩擦和抗損傷(shang) 的作用。

• 表皮由複層扁平上皮構成，從(cong) 基底層到表麵可分為(wei) 五層，包括基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。

• 表皮角質形成細胞是一種能合成角質蛋白的上皮細胞，為(wei) 表皮的主體(ti) ，從(cong) 表皮深層開始逐漸增殖、分化。

• 角質形成細胞在角化過程中，細胞核與(yu) 細胞器完全消失，細胞失去生理功能並脫落。

• 表皮角質形成細胞主要分布於(yu) 表皮基底層，隨著細胞程序性死亡後，細胞向表皮產(chan) 生角化並移動。

• 角質形成細胞最終產(chan) 生角質蛋白，在角化過程中，一般可分為(wei) 四層：基底層、棘層、顆粒層和角質層。

• 角質形成細胞分化成熟表現為(wei) 從(cong) 基底層向角質層的逐漸移行。

• 些部位，特別是掌蹠部位，角質層下方還可見到透明層。

小鼠表皮角質形成細胞參數表

小鼠表皮角質形成細胞是一種貼壁細胞，細胞形態呈上皮細胞樣。在標準操作流程下，細胞可傳(chuan) 1-2代。

初次處理

• 從(cong) 包裝中取出T25細胞培養(yang) 瓶，用75%酒精消毒瓶身。

• 拆下封口膜，放入37℃、5%CO₂、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置3-4小時，以穩定細胞狀態。

貼壁細胞消化

• 吸出T25細胞培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS清洗細胞一次。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培養(yang) 瓶中，輕微轉動培養(yang) 瓶至消化液覆蓋整個(ge) 培養(yang) 瓶底後，吸出多餘(yu) 胰蛋白酶消化液，37℃溫浴1-3分鍾；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓後，再加入5mL完全培養(yang) 基終止消化。

• 用吸管輕輕吹打混勻，按傳(chuan) 代比例接種T25培養(yang) 瓶傳(chuan) 代，然後補充新鮮的完全培養(yang) 基至5mL，置於(yu) 37℃、5%CO₂、飽和濕度的細胞培養(yang) 箱中靜置培養(yang) 。

• 待細胞完全貼壁後，培養(yang) 觀察；之後按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yang) 基。

細胞收貨脫落

• 收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5分鍾，保留沉澱。

• 添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至離心管中，重懸沉澱，放置於(yu) 37℃消化3分鍾（或4℃冰箱靜置5-7分鍾）；消化完向離心管內(nei) 加入5mL完全培養(yang) 基終止消化。

• 經1000rpm離心5分鍾，丟(diu) 棄上清，用5mL完全培養(yang) 基（補加1%FBS，促進貼壁）重懸沉澱，接種於(yu) 新的培養(yang) 瓶內(nei) 。

• 待細胞完全貼壁後，培養(yang) 觀察；之後按照換液頻率更換新鮮的完全培養(yang) 基（37℃預熱）。

細胞實驗

• 因kaiyun网站安全貼壁特殊性，貼壁的kaiyun网站安全在消化後轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yang) 板、共聚焦培養(yang) 皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm²）、多聚賴氨酸PLL（0.1mg/mL）、明膠（0.1%），依據細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。

注意事項

• 培養(yang) 基在4℃條件下可保存3-6個(ge) 月。

• 在細胞培養(yang) 過程中，請注意保持無菌操作。

• 傳(chuan) 代培養(yang) 過程中，胰酶消化時間不宜過長，否則會(hui) 影響細胞貼壁及其生長狀態。

• 建議客戶收到細胞後前3天每個(ge) 倍數各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便於(yu) 和技術部溝通。