原代大鼠表皮角化上皮細胞

原代大鼠表皮角化上皮細胞（Keratinocytes, KCs）是從(cong) 大鼠正常皮膚組織中提取的細胞，主要用於(yu) 皮膚生物學、藥物篩選及毒理學研究。大鼠表皮角化上皮細胞來源於(yu) 大鼠表皮的基底層和棘層，通過酶消化法進行分離，常用酶包括膠原酶和胰酶，經過處理後可獲得純度高於(yu) 90%的角化細胞。角化細胞為(wei) 複層鱗狀上皮細胞，貼壁生長，形態多呈多角形或扁平狀，具備較強的分化能力，隨著向表層移動逐漸失去分裂活性並形成角質層。在體(ti) 外培養(yang) 過程中，通常采用廣譜角蛋白（Pan Cytokeratin）免疫熒光染色進行鑒定，以確認其為(wei) 角化細胞並確保純度。

表皮角化上皮細胞特性特征

• 分化過程：從(cong) 基底層到表麵，角化細胞經曆基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層的分化過程，隨著向表層的推移，細胞的形態和功能逐漸變化。

• 角蛋白表達：角化細胞主要表達多種類型的角蛋白（如K17、K14等），這些角蛋白在細胞的分化和功能中起著重要作用。K17在銀屑病等皮膚病中的表達顯著增加。
  

• 粘附分子：表皮角化上皮細胞能夠產(chan) 生粘附分子和細胞因子，這些物質與(yu) 天然免疫和體(ti) 內(nei) 穩態相關(guan) 。

• 基因表達：原代大鼠表皮角化細胞在不同階段的分化過程中，其相關(guan) 基因（如p63、CK-14）會(hui) 被激活或抑製，反映出其增殖與(yu) 分化狀態。
  

• 轉錄因子：p63作為(wei) 表皮幹細胞標誌物，在維持表皮幹細胞的增殖和自我更新中發揮關(guan) 鍵作用

大鼠表皮角化上皮細胞參數表

原代大鼠表皮角化上皮細胞培養教程

細胞分離步驟

• 在無菌條件下，從(cong) 成年大鼠獲取皮膚組織，並剪成約1 cm²的小塊，以增加表皮角化上皮細胞的分離效率。
  

• 將皮膚組織置於(yu) 含有0.1%胰蛋白酶和膠原酶的混合消化液中，放置在37°C水浴中消化1-2小時，期間輕輕搖動以促進表皮角化上皮細胞的釋放。
  

• 為(wei) 進一步分散細胞，加入透明質酸酶消化30分鍾，增加表皮角化上皮細胞的分離效率。

• 將消化後的細胞混合物通過70μm細胞濾器進行過濾，以去除未消化的組織塊，並收集表皮角化上皮細胞。
  

• 過濾後的細胞懸液轉移至離心管，以1400 rpm離心8分鍾，收集沉澱的表皮角化上皮細胞。

細胞重懸與接種

• 使用無血清培養(yang) 基將收集的表皮角化上皮細胞沉澱重懸，並調整細胞濃度至 $1 \times 10^7$ cells/cm²。
  

• 將重懸的表皮角化上皮細胞接種於(yu) 預先包被I型膠原的培養(yang) 板或培養(yang) 皿中，以促進細胞貼壁和生長。
  

• 接種後，將培養(yang) 皿放置於(yu) 37°C、5% CO₂的培養(yang) 箱中，靜置1-2小時以確保表皮角化上皮細胞貼壁。

培養與維護

• 接種後48小時進行首次換液，以去除未貼壁的表皮角化上皮細胞及殘留的消化酶。此後每天更換新鮮培養(yang) 基，維持表皮角化上皮細胞的生長狀態。
  

• 每日觀察表皮角化上皮細胞在顯微鏡下的生長狀態，記錄細胞形態變化和貼壁情況。表皮角化上皮細胞呈多角形或扁平狀，並具有明顯的貼壁生長特征。
  

• 當表皮角化上皮細胞達到80%-90%匯合時，使用0.05%胰蛋白酶消化細胞，傳(chuan) 代比例通常為(wei) 1:2或1:3。傳(chuan) 代過程中，輕輕拍打培養(yang) 皿以促進表皮角化上皮細胞的脫落，並避免過度消化。
  

注意事項

• 操作過程中，需保持嚴(yan) 格的無菌環境，防止表皮角化上皮細胞汙染。

• 在細胞培養(yang) 初期，應密切觀察表皮角化上皮細胞的生長狀態，如發現異常（如形態變化、細胞死亡或汙染），應及時處理。

• 使用專(zhuan) 用的無血清培養(yang) 基，確保表皮角化上皮細胞培養(yang) 條件的穩定性和一致性，並遵循製造商提供的使用說明。

• 傳(chuan) 代後應重新補充培養(yang) 基中的生長因子，維持表皮角化上皮細胞的增殖和分化能力。

• 進行常規的病原體(ti) 檢測，以確保表皮角化上皮細胞培養(yang) 的安全性，排除HIV、HBV、HCV等常見汙染風險。