A431細胞係（人表皮癌細胞係）

A431細胞係是從(cong) 一位85歲女性患者的皮膚表皮樣癌中分離，由D.J. Giard等人於(yu) 1970年代建立。A431細胞係來源於(yu) 實體(ti) 瘤，具有上皮形態，細胞呈貼壁生長，廣泛應用於(yu) 癌症生物學、免疫腫瘤學和毒理學研究領域，A-431細胞係常用於(yu) 致瘤性研究。

A431細胞是超三倍體(ti) ，模態染色體(ti) 數為(wei) 74，出現在約36%的細胞中，倍性較高的細胞比例為(wei) 1.0%。

A431細胞係特性特征

• EGFR過表達：A431細胞高度表達表皮生長因子受體(ti) （EGFR），是研究EGFR在腫瘤發生中作用的重要模型。
  

• 同工酶特征：AK-1 1; ES-D 1; G6PD B; GLO-I 2; Me-2 0; PGM1 1; PGM3 1。

• 致瘤性：在免疫抑製的小鼠體(ti) 內(nei) ，A431細胞可以形成快速生長的皮下腫瘤。在軟瓊脂中也能形成集落。

A431細胞係參數表

A431人表皮癌細胞係培養教程

複蘇A431細胞

• 從(cong) 液氮中取出凍存管，迅速放入37℃水浴中，輕輕搖晃以加速解凍過程。
  

• 準備4 mL完全培養(yang) 基（如DMEM，含10%胎牛血清和1%抗生素）。

• 將解凍的1 mL A431細胞懸液轉移至含4 mL培養(yang) 基的無菌離心管中，輕輕混合均勻。
  

• 在1000 rpm下離心3分鍾，棄去上清液以去除凍存液中的DMSO。
  

• 加入1-2 mL培養(yang) 基，輕輕吹打以重懸A431細胞。
  

• 將A431細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基（如在10 cm培養(yang) 皿中加入約8 mL），放入37℃、5% CO₂的培養(yang) 箱中過夜。
  

• 第二天更換培養(yang) 基，並檢查A431細胞的密度及健康狀態。
  

傳代A431細胞

• 當A431細胞密度達到80%-90%時，準備進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去培養(yang) 上清，用不含鈣、鎂離子的PBS洗滌A431細胞1-2次，以去除殘留的培養(yang) 基和死細胞。
  

• 加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA），確保完全覆蓋A431細胞。
  

• 將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察A431細胞是否開始脫落。

• 當A431細胞大部分變圓並脫落時，輕輕敲擊培養(yang) 瓶，並加入少量培養(yang) 基以終止消化。
  

• 加入6-8 mL培養(yang) 基，輕輕混勻後轉移至無菌離心管中，1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液。
  

• 加入1-2 mL培養(yang) 基，輕輕吹打以重懸A431細胞。
  

• 將A431細胞懸液以1:2的比例分配到新的培養(yang) 皿或瓶中，每個(ge) 含8 mL培養(yang) 基，放入培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。
  

凍存A431細胞

• 準備凍存：當A431細胞狀態良好且生長適中時，進行凍存處理。

• 收集A431細胞及培養(yang) 液，轉移至無菌離心管中。
  

• 在1000 rpm下離心4分鍾，棄去上清液。
  

• 加入含10% DMSO的凍存液，輕輕混勻。
  

• 將A431細胞懸液分裝至凍存管中，標記清楚後放入-80℃冰箱中進行短期凍存，或直接轉移至液氮中進行長期凍存。
  

注意事項

• 在整個(ge) A431細胞培養(yang) 過程中，保持嚴(yan) 格的無菌操作，以防止細胞汙染。

• 定期檢查A431細胞的生長狀態，適時更換培養(yang) 基。

• 確保A431細胞在傳(chuan) 代和凍存過程中處於(yu) 健康狀態，避免過度生長或細胞死亡。