A375細胞（人惡性黑色素瘤細胞）

A-375人惡性黑色素瘤細胞係是從(cong) 一位54歲女性患者的皮膚惡性黑色素瘤中分離，具有上皮樣形態。A375細胞係最早由D.J. Giard等人在1975年建立，已廣泛應用於(yu) 腫瘤學研究和藥物篩選。

A375細胞的染色體(ti) 數為(wei) 亞(ya) 三倍體(ti) ，具有62條染色體(ti) 模數，每個(ge) 細胞通常含有9條標記染色體(ti) ，並且在N2、N6和N22染色體(ti) 上各有一個(ge) 拷貝。作為(wei) NRAS突變體(ti) A375的同源對照細胞係，A375細胞是研究毒理學和免疫腫瘤學的重要模型，特別適合作為(wei) 轉染實驗的宿主細胞。

A375細胞特性特征

• 在免疫抑製的小鼠中，A375細胞能形成快速增長的皮下腫瘤，顯示出其良好的致瘤性。

• A375細胞係還可以在普通成纖維細胞飼養(yang) 層和瓊脂上形成克隆。

• 基因突變：A-375細胞是NRAS突變體(ti) ，常用於(yu) 與(yu) NRAS突變相關(guan) 的研究。

• 表達特征：A375細胞對多種藥物敏感，如新狼毒素A能夠以時間和劑量依賴的方式顯著抑製其生長和增殖，導致細胞體(ti) 積縮小、皺縮以及核質濃縮。

• 毒理學研究：A-375細胞被廣泛用於(yu) 毒理學研究，尤其是藥物對黑色素瘤細胞的影響。

A375細胞參數表

A375人惡性黑色素瘤細胞培養教程

A375細胞複蘇

• 準備培養(yang) 基：將所需的完全培養(yang) 基（例如88% DMEM（高糖） + 10%胎牛血清（FBS） + 1%青黴素/鏈黴素（P/S） + 1%穀氨酰胺）提前放入37℃培養(yang) 箱中預熱30分鍾，以便複蘇A375細胞時使用。
  

• 取出A375細胞：從(cong) 液氮罐中取出凍存的A375細胞管，迅速放入37℃水浴中，輕輕搖動至細胞完全解凍（約1-2分鍾）。

• 轉移A375細胞：將解凍後的A375細胞懸液轉移至含有5-10毫升預熱培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻。

• 離心：以1000 rpm離心5分鍾，去除上清液，保留沉澱的A375細胞。

• 重懸A375細胞：用適量新鮮培養(yang) 基重懸A375細胞，確保細胞充分混勻。

• 接種A375細胞：將重懸後的A375細胞接種至預先準備好的T25或T75培養(yang) 瓶中。

• 培養(yang) 條件：將培養(yang) 瓶放入37℃的培養(yang) 箱中，維持95%空氣和5%二氧化碳的培養(yang) 環境以促進A375細胞生長。

A375細胞傳代

• 觀察A375細胞狀態：在顯微鏡下觀察A375細胞，當細胞匯合度達到70%-80%時即可進行傳(chuan) 代。
  

• 去除培養(yang) 基：吸走舊培養(yang) 基，輕輕用PBS洗滌A375細胞，去除死細胞和殘留物。

• 消化A375細胞：加入適量0.25%胰酶-EDTA，輕輕搖動培養(yang) 瓶，確保A375細胞均勻接觸胰酶，通常消化3-5分鍾。

• 停止消化：當A375細胞開始脫落時，立即加入新鮮培養(yang) 基停止消化反應。

• 離心：將A375細胞轉移至離心管中，1000 rpm離心5分鍾，去除上清液。

• 重懸A375細胞：用新鮮培養(yang) 基重懸A375細胞，並按1:2或1:3比例接種至新培養(yang) 瓶中。

• 換液：每周2-3次更換培養(yang) 基，以保持A375細胞生長環境的清潔。

A375細胞在瓊脂中的克隆形成

• 準備瓊脂培養(yang) 基：將2倍濃度的DMEM基礎培養(yang) 基與(yu) 等量的2%液體(ti) 瓊脂混合，製成1%瓊脂培養(yang) 基，以便用於(yu) A375細胞的克隆形成實驗。
  

• 鋪底層瓊脂：將1%瓊脂培養(yang) 基分注至培養(yang) 皿中，靜置至凝固。

• 製備A375細胞懸液：將對數生長期的A375細胞消化成單細胞懸液，調整濃度至1×10^4-1×10^5 cells/ml。

• 加入頂層瓊脂：將A375細胞懸液與(yu) 等量的1%液體(ti) 瓊脂混勻，迅速加入底層瓊脂上，靜置至凝固。

• 加培養(yang) 基：在瓊脂表麵小心加入培養(yang) 基，避免破壞瓊脂層。

• 培養(yang) ：將培養(yang) 皿置於(yu) 37°C、5%CO2培養(yang) 箱中，每3-4天更換培養(yang) 基。

• 觀察克隆形成：通常2-3周後，在顯微鏡下可見肉眼可見的A375細胞克隆。

A375細胞在成纖維細胞飼養層中的培養

• 準備飼養(yang) 層：在培養(yang) 皿中接種適量成纖維細胞，待其生長至100%匯合，以便接種A375細胞。
  

• 處理飼養(yang) 層：用PBS洗滌成纖維細胞，然後用含10μg/ml米托蒽醌的PBS處理2小時進行滅活。

• 洗滌：用PBS洗滌飼養(yang) 層3次以去除滅活液。

• 接種A375細胞：將對數生長期的A375細胞接種至飼養(yang) 層上，細胞密度根據實驗需要調整。

• 培養(yang) ：在37°C、5%CO2培養(yang) 箱中培養(yang) ，2-3天更換一次培養(yang) 基。

• 觀察克隆形成：定期觀察A375細胞在飼養(yang) 層上形成的克隆。

注意事項

• 無菌操作：整個(ge) 操作過程需嚴(yan) 格保持無菌，防止A375細胞汙染。

• 細胞狀態監測：複蘇和傳(chuan) 代後24小時內(nei) 應及時觀察A375細胞狀態，必要時更換培養(yang) 基以去除死亡細胞。

• 細胞顆粒感：A375細胞在培養(yang) 過程中可能會(hui) 出現細胞內(nei) 黑點和細胞外顆粒，建議使用優(you) 質胎牛血清和培養(yang) 基。