SK-MEL-5細胞（人皮膚惡性黑色素瘤細胞）

SK-MEL-5細胞係來源於(yu) 一名24歲白人女性的惡性黑色素瘤皮膚組織。SK-MEL-5細胞係由T. Takahashi及其團隊成功分離，並在黑色素瘤研究中被廣泛應用。尤其在轉染實驗以及黑色素瘤患者的特異性抗體(ti) 檢測中，SK-MEL-5細胞表現出重要的研究價(jia) 值。

SK-MEL-5細胞染色體(ti) 核型為(wei) 超五倍體(ti) ，模態數為(wei) 120，染色體(ti) 數在95至133之間波動。在9%的細胞中觀察到120條染色體(ti) 。大部分細胞的染色體(ti) 數目集中在114到123之間。SK-MEL-5細胞係的常見標記染色體(ti) 包括9q+（每細胞4個(ge) 拷貝）、t(1q;8q)和del(5)(q34)（每細胞3個(ge) 拷貝），以及14q+（每細胞2個(ge) 拷貝）。雖然部分染色體(ti) 僅(jin) 以單拷貝形式存在，但較為(wei) 罕見。此外，大多數細胞具有三條正常的X染色體(ti) ，同時缺失N9染色體(ti) ，N7和N20染色體(ti) 每細胞存在7至8個(ge) 拷貝。

SK-MEL-5細胞特性特征

• 致瘤性：在裸小鼠中能夠形成惡性黑色素瘤，並且可轉移至腋窩淋巴結。

• 基因突變：表達突變的B-Raf（V600E）和野生型N-Ras，這些特征在黑色素瘤中常見。

• 抗原表達：O型血；Rh+；HLA A2、A11、B40、Bw16等。

• 表達多種同工酶，包括：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，1-2；PGM1，1-2

SK-MEL-5細胞參數表

SK-MEL-5人皮膚惡性黑色素瘤細胞培養教程

SK-MEL-5細胞複蘇

• 將水浴鍋預熱至37℃，為(wei) 解凍SK-MEL-5細胞做好準備。
  

• 配製完全培養(yang) 基（DMEM培養(yang) 基，添加10%胎牛血清和1%青黴素-鏈黴素溶液）。

• 從(cong) 液氮中取出凍存的SK-MEL-5細胞，迅速置於(yu) 37℃的水浴中，輕輕搖動凍存管，加速解凍，確保1-2分鍾內(nei) 完全融化。
  

• 注意：解凍過程中避免細胞在水浴中停留時間過長，以免損害SK-MEL-5細胞活性。

• 解凍後，將SK-MEL-5細胞懸液轉移至離心管中，加入4 mL預熱的完全培養(yang) 基，輕輕混勻。
  

• 在1000 rpm離心3分鍾，棄去上清液。

• 加入1-2 mL新鮮完全培養(yang) 基，輕輕吹打SK-MEL-5細胞，確保充分重懸。
  

• 將細胞懸液轉移至T25培養(yang) 瓶或6 cm培養(yang) 皿，加入適量完全培養(yang) 基，並放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 複蘇後的SK-MEL-5細胞通常需要24小時適應環境。第二天觀察細胞狀態並更換培養(yang) 基，去除死亡細胞和殘留的DMSO。

SK-MEL-5細胞傳代

• 當SK-MEL-5細胞生長達到80%-90%匯合時，需要進行傳(chuan) 代操作。
  

• 傳(chuan) 代前準備新鮮的完全培養(yang) 基和新的培養(yang) 瓶。

• 用無鈣、無鎂的PBS清洗SK-MEL-5細胞1-2次，去除殘留的培養(yang) 基。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶（0.25%胰蛋白酶+0.53 mM EDTA溶液），確保覆蓋所有SK-MEL-5細胞。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中，觀察1-2分鍾，直至細胞變圓並開始脫落。

• 當大部分SK-MEL-5細胞脫落時，立即加入2-3 mL完全培養(yang) 基中和胰蛋白酶的作用。
  

• 將細胞輕輕吹打後，轉移至離心管中，在1000 rpm下離心5分鍾，棄去上清液。

• SK-MEL-5細胞重懸於(yu) 適量的完全培養(yang) 基中，根據需要按1:2或1:3的比例分配到新的培養(yang) 瓶中。
  

• 放入37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中繼續培養(yang) ，定期觀察SK-MEL-5細胞的生長狀態。

SK-MEL-5細胞凍存

• 選擇SK-MEL-5細胞生長狀態良好的時間點進行凍存。配製無血清的細胞凍存液（90% FBS + 10% DMSO）。
  

• 按照傳(chuan) 代步驟消化並收集SK-MEL-5細胞。離心後棄去上清液，並用PBS洗滌細胞1次。
  

• 使用血球計數板或自動計數儀(yi) 計數，確保SK-MEL-5細胞密度為(wei) 5×10^6至1×10^7 cells/mL。
  

• 依據計數結果，將細胞重懸於(yu) 無血清凍存液中。

• 將1 mL SK-MEL-5細胞懸液分裝至凍存管，標記清晰。
  

• 將凍存管置於(yu) -80℃冰箱中保存24小時，隨後轉移至液氮中長期保存。