B16細胞（小鼠黑色素瘤細胞）

B16小鼠黑色素瘤細胞係源自C57BL/6小鼠的皮膚黑色素瘤，最初由美國傑克遜實驗室於(yu) 1954年開發。B16細胞係表現為(wei) 黑色素生成陽性，但大多數細胞在體(ti) 外培養(yang) 時並不顯色。在某些培養(yang) 條件下，B16細胞會(hui) 分泌大量黑色素。無論細胞在體(ti) 外是否產(chan) 生黑色素，當其植入C57BL/6小鼠體(ti) 內(nei) 後，形成的瘤體(ti) 均呈現黑色。

B16細胞係包括多個(ge) 亞(ya) 型，如B16-F0、B16-F1和B16-F10。其中，B16-F10是B16-F0的亞(ya) 係，以其顯著的轉移性而著稱，相比之下，B16-F0的轉移能力較低。

B16細胞特性特征

• 產(chan) 生黑色素：B16細胞能夠合成和分泌黑色素，這是其作為(wei) 黑色素瘤細胞的關(guan) 鍵特征。
  

• 酪氨酸酶活性：B16細胞表現出高酪氨酸酶活性，酪氨酸酶是黑色素合成的關(guan) 鍵酶。

• 高轉移性：B16細胞具有在脾髒、肝髒和肺部轉移的能力。

• 不同亞(ya) 係：如B16F10亞(ya) 係具有較高的肺轉移能力。

• 黑色素相關(guan) 基因：B16細胞表達與(yu) 黑色素合成相關(guan) 的基因，如酪氨酸酶基因。
  

• 遺傳(chuan) 異質性：B16細胞係表現出遺傳(chuan) 和表型的異質性，即使在同一培養(yang) 物中也可能存在不同的遺傳(chuan) 特性。
  

• 致瘤性：B16是一種具有侵襲、遷移和增殖等腫瘤樣特性的致瘤細胞係。

• 酪氨酸酶陽性：B16細胞對酪氨酸酶呈強陽性反應，這是鑒定黑色素瘤細胞的重要標誌。

• 多種亞(ya) 型：根據細胞形態和黑色素含量，B16細胞可分為(wei) 多種亞(ya) 型，包括大上皮樣細胞、小上皮樣細胞、梭形細胞、畸形細胞和樹枝突細胞。

B16細胞參數表

B16小鼠黑色素瘤細胞培養教程

B16細胞複蘇

• 將凍存的B16細胞快速解凍於(yu) 37°C水浴中。

• 將細胞懸液轉移至含預熱完全培養(yang) 基的離心管中。

• 以800 rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 用新鮮培養(yang) 基重懸B16細胞，並轉移至培養(yang) 瓶中。

日常培養

• B16細胞為(wei) 貼壁生長細胞。

• 每2-3天更換培養(yang) 基一次。

• 當B16細胞密度達到80-90%時，進行傳(chuan) 代操作。

傳代操作

• 棄去舊培養(yang) 基，用PBS輕柔洗滌B16細胞1-2次。

• 加入適量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C消化2-3分鍾。

• 當B16細胞在顯微鏡下開始變圓並脫落時，加入含血清的完全培養(yang) 基以終止消化。

• 吹打收集細胞，800 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，用新鮮培養(yang) 基重懸B16細胞。

• 按1:3至1:6的比例接種到新的培養(yang) 瓶中。

細胞凍存

• 收集對數生長期的B16細胞。

• 使用含10% DMSO的完全培養(yang) 基作為(wei) 凍存液。

• 將B16細胞懸液分裝到凍存管中，並置於(yu) -80°C冰箱或液氮中保存。

特殊應用

• 黑色素生成研究：對於(yu) 研究B16細胞黑色素生成的特性，可能需要調整培養(yang) 條件或添加特定試劑。

• 轉移研究：選擇適合的高轉移亞(ya) 係，如B16-F10，用於(yu) 研究轉移能力。

確保B16細胞純度和真實性

• 細胞形態觀察：定期使用顯微鏡檢查B16細胞的形態特征，確保其保持上皮樣和紡錘形的典型特征。

• 黑色素產(chan) 生檢測：通過觀察培養(yang) 基顏色變化或細胞沉澱物顏色來判斷B16細胞的黑色素產(chan) 生。

• 酪氨酸酶活性測定：檢測B16細胞的酪氨酸酶活性以驗證其特性。

• 基因表達分析：檢測與(yu) 黑色素合成相關(guan) 的基因表達，如酪氨酸酶基因。

• STR分析：通過短串聯重複序列（STR）分析確認B16細胞係的遺傳(chuan) 特征。

• 定期鑒定：建議每3-6個(ge) 月進行一次B16細胞鑒定以確保其純度和特性。

常見錯誤及避免措施

• 過度消化：使用胰蛋白酶消化B16細胞時間過長可能導致細胞損傷(shang) 或死亡。控製消化時間，觀察細胞狀態。

• 密度控製不當：B16細胞密度過高或過低都會(hui) 影響生長狀態。定期檢查並調整細胞密度。

• 培養(yang) 基更換頻率：由於(yu) B16細胞可能產(chan) 生大量黑色素，建議適當增加換液頻率以維持良好培養(yang) 環境。

• 汙染問題：操作時注意無菌操作，防止細菌或真菌汙染。

• 傳(chuan) 代次數過多：長期傳(chuan) 代可能導致B16細胞特性改變。控製傳(chuan) 代次數，定期驗證細胞特性。

• 凍存和複蘇不當：不正確的凍存和複蘇程序可能導致B16細胞活力下降或特性改變。嚴(yan) 格按照凍存和複蘇程序操作。

• 忽視細胞異質性：B16細胞可能存在遺傳(chuan) 和表型的異質性，影響實驗結果的一致性。定期進行細胞鑒定以確保實驗結果的可靠性。