原代大鼠腎小球內(nei) 皮細胞

原代大鼠腎小球內(nei) 皮細胞（Rat Primary Glomerular Endothelial Cells）通常來源於(yu) 健康大鼠腎髒組織，廣泛應用於(yu) 研究腎髒疾病和免疫病理機製。分離腎小球內(nei) 皮細胞通常采用膠原酶消化和差異篩選法。提取時，選用6-8周齡的健康雄性SD大鼠或C57BL/6J小鼠，在無菌條件下通過手術獲得腎髒，剝離腎包膜，將其切成1-3毫米小塊，使用抗生素生理鹽水清洗，接著進行膠原酶消化，再通過離心或篩選法純化出高純度的內(nei) 皮細胞。原代大鼠腎小球內(nei) 皮細胞在體(ti) 外培養(yang) 時能表現出典型的內(nei) 皮細胞形態，以單層貼壁生長。

原代大鼠腎小球內皮細胞特性特征

• 原代大鼠腎小球內(nei) 皮細胞能夠分泌多種生物活性物質，包括一氧化氮（NO）、前列環素（PGI2）、內(nei) 皮素（ET-1）等，這些物質對血管擴張和血小板活性有調節作用。

• 糖萼：腎小球內(nei) 皮細胞表麵覆蓋有糖萼，這是由多糖和蛋白質複合物組成，主要包括硫酸乙酰肝素等糖胺聚糖。糖萼通過其負電荷可以有效防止帶負電的大分子（如白蛋白）通過濾過膜，從(cong) 而維持腎小球的電荷選擇屏障。
  

• 窗口結構：內(nei) 皮細胞表麵存在直徑約60-80納米的窗口結構，這些窗口占據了腎小球內(nei) 皮細胞表麵積的30%-50%。這種結構有助於(yu) 提高超濾速率，但也可能導致大分子物質的漏出。

• 基因表達特征：腎小球內(nei) 皮細胞表達多種與(yu) 血管生成、炎症反應和細胞凋亡相關(guan) 的基因。例如，它們(men) 在損傷(shang) 應答時會(hui) 顯著上調與(yu) 炎症相關(guan) 的細胞因子，如IL-1、IL-8和TNF-α

原代大鼠腎小球內皮細胞參數表

原代大鼠腎小球內皮細胞培養教程

大鼠腎小球內皮細胞的提取

• 腎髒取出：在無菌條件下獲取健康大鼠的腎髒並剝離腎包膜，以確保所分離的大鼠腎小球內(nei) 皮細胞的純度。

• 組織處理：將腎髒組織切成1-3毫米的小塊，放入含有抗生素的生理鹽水中清洗，從(cong) 而去除雜質並避免對大鼠腎小球內(nei) 皮細胞的汙染。

• 消化處理：利用膠原酶（如膠原酶IV）對腎組織消化，通常在37℃下持續30分鍾至1小時。消化後，將混合液通過細胞篩過濾以分離出大鼠腎小球內(nei) 皮細胞。

大鼠腎小球內皮細胞的培養

• 接種細胞：將消化和過濾後的大鼠腎小球內(nei) 皮細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶，以1×10^5到5×10^5的細胞密度接種，並添加含10%-20%胎牛血清的培養(yang) 基（DMEM或RPMI 1640）。

• 培養(yang) 條件：將含大鼠腎小球內(nei) 皮細胞的培養(yang) 瓶置於(yu) CO₂培養(yang) 箱中，溫度設為(wei) 37℃，CO₂濃度為(wei) 5%，並確保培養(yang) 箱內(nei) 濕度充足。

細胞觀察與維護

• 定期檢查：每日檢查大鼠腎小球內(nei) 皮細胞的狀態，包括形態、增殖和有無汙染。用倒置顯微鏡觀察細胞的生長狀況。

• 更換培養(yang) 基：當大鼠腎小球內(nei) 皮細胞的匯合度達到80%時，更換新鮮培養(yang) 基。去除舊培養(yang) 基後用PBS清洗細胞，再加入新培養(yang) 基。

大鼠腎小球內皮細胞的傳代

• 傳(chuan) 代步驟：當大鼠腎小球內(nei) 皮細胞達到90%-100%匯合度時，使用胰蛋白酶消化，消化過程通常在37℃下持續2-5分鍾。隨後通過離心收集細胞，並將大鼠腎小球內(nei) 皮細胞重新接種於(yu) 新的培養(yang) 瓶中，繼續培養(yang) 。

注意事項

• 無菌操作：在培養(yang) 過程中保持無菌環境，所有操作盡量在超淨工作台內(nei) 進行，以避免大鼠腎小球內(nei) 皮細胞受到汙染。

• 監測pH值：確保培養(yang) 基的pH值在7.2-7.4之間，保持大鼠腎小球內(nei) 皮細胞適宜的生長環境。

• 氣體(ti) 交換：CO₂濃度需維持在5%，並定期檢查培養(yang) 箱的氣體(ti) 和濕度環境。

• 實驗記錄：記錄每次傳(chuan) 代、觀察和實驗數據，以便對大鼠腎小球內(nei) 皮細胞的培養(yang) 過程進行分析和優(you) 化。