MLOY4細胞（小鼠骨樣細胞係）

MLO-Y4小鼠骨樣細胞係是由Lynda F. Bonewald教授團隊於(yu) 1997年在美國德克薩斯大學衛生科學中心建立。MLOY4細胞係是通過從(cong) 14日齡的（C57BL/6J x BALB/cJ）F2 Bgla啟動子T-Ag轉基因小鼠中分離骨細胞，然後通過SV40大T抗原的表達進行永生化而得到的。
MLO-Y4細胞與(yu) 原代骨細胞在性質上非常相似，但與(yu) 成骨細胞不同。MLOY4細胞具有顯著的骨細胞特性。

MLOY4細胞呈現典型的樹突狀形態，與(yu) 體(ti) 內(nei) 骨細胞相似、產(chan) 生廣泛、複雜的樹突突起、上皮細胞樣形態，貼壁生長。

MLOY4小鼠骨樣細胞係特性特征

分子和表達特征

• 高表達骨鈣素（osteocalcin）

• 低表達堿性磷酸酶（alkaline phosphatase）

• 產(chan) 生非常少量的I型膠原mRNA

• 表達T抗原（T-antigen）

• 表達骨橋蛋白（osteopontin）

• 表達神經抗原CD44

• 高表達縫隙連接蛋白43（connexin 43）

• 表達抗原E11

基因特征

• 缺乏可檢測到的成骨細胞特異性因子2（Cbfa1/Runx2）的mRNA表達

• SV40大T抗原在骨鈣素啟動子控製下表達，實現細胞永生化

功能特征

• 對機械刺激高度敏感

• 具有一定的成骨能力和骨吸收能力

• 能夠分泌多種細胞因子和生長因子，參與(yu) 骨重塑過程

其他特征

• 來源於(yu) 14天齡(C57BL/6J x BALB/cJ)F2 Bgla啟動子T-Ag轉基因小鼠的長骨

• 性質與(yu) 原代骨細胞非常相似，但與(yu) 原代成骨細胞有所不同

• 適用於(yu) 研究機械應力對骨細胞功能的影響

• 可用於(yu) 研究骨細胞與(yu) 其他骨細胞（如成骨細胞和破骨細胞）的相互作用

MLOY4細胞參數表

MLOY4小鼠骨樣細胞係培養教程

細胞複蘇

• 收到MLOY4細胞後，用75%酒精消毒細胞瓶外表麵。

• 將T25培養(yang) 瓶放置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中2-3小時，使MLOY4細胞逐漸恢複。

• 在顯微鏡下（4x或5x）觀察MLOY4細胞狀態，確保MLOY4細胞健康並記錄圖像（10x和20x各2-3張）。

• 檢查MLOY4細胞的生長和貼壁情況。

細胞培養

• 低密度培養(yang) ：如果MLOY4細胞密度低於(yu) 60%，去除舊的培養(yang) 基，加入6-8mL新配製的完全培養(yang) 基，繼續培養(yang) 。

• 高密度培養(yang) ：如果MLOY4細胞密度達到70%-80%，進行傳(chuan) 代。

• 注意：運輸中的培養(yang) 基不可用於(yu) MLOY4細胞培養(yang) ，需用新鮮配製的完全培養(yang) 基。

細胞傳代

• 第一次傳(chuan) 代時，建議將T25培養(yang) 瓶以1:2的比例傳(chuan) 代MLOY4細胞。

• 如果因運輸振動導致MLOY4細胞脫落，可通過離心回收這些MLOY4細胞。

細胞凍存

• 凍存液配方：90%血清 + 10% DMSO。建議現用現配，以保持MLOY4細胞凍存液的新鮮度。

注意事項

• MLOY4細胞僅(jin) 限於(yu) 科研使用。

• 如發現培養(yang) 瓶破損、液體(ti) 溢出或MLOY4細胞汙染，請立即拍照並聯係供應商。

• 在運輸過程中，MLOY4細胞可能會(hui) 因振動而脫落或聚集成團，需特別注意。

• 定期觀察MLOY4細胞狀態，確保及時處理問題。

常見問題處理

培養基汙染處理

• 立即隔離：將汙染的MLOY4細胞培養(yang) 瓶從(cong) 培養(yang) 箱中取出，防止擴散。

• 記錄和拍照：詳細記錄汙染情況，並拍照以備記錄。

• 廢棄處理：按照生物安全規程對汙染的MLOY4細胞進行滅菌後廢棄。

• 清潔消毒：徹底清潔和消毒相關(guan) 設備，防止交叉汙染。

• 檢查原因：分析汙染可能來源，如操作過程、試劑質量等。

• 重新培養(yang) ：使用新無菌的培養(yang) 基和器具重新開始MLOY4細胞培養(yang) 。

• 預防措施：加強無菌操作技術，定期檢查設備和試劑質量。

細胞貼壁不良處理

• 延長貼壁時間：將MLOY4細胞培養(yang) 瓶放回37°C培養(yang) 箱，延長貼壁時間至4-6小時。

• 增加血清濃度：短期內(nei) 將血清濃度提高至15-20%以促進MLOY4細胞貼壁。

• 調整培養(yang) 基pH：確保pH在7.2-7.4，可能需要調整CO2濃度。

• 使用細胞外基質：用膠原蛋白或纖連蛋白處理培養(yang) 表麵增強MLOY4細胞貼壁。

• 降低傳(chuan) 代密度：若傳(chuan) 代後MLOY4細胞貼壁不良，可適當降低傳(chuan) 代密度。

• 檢查培養(yang) 基成分：確保營養(yang) 成分充足以滿足MLOY4細胞的需求。

• 避免機械損傷(shang) ：操作要輕柔，避免對MLOY4細胞的過度震蕩。

• 優(you) 化培養(yang) 條件：調整溫度、濕度等以確保MLOY4細胞的最佳生長環境。