NS1細胞係（P3/NSI/1-Ag4-1小鼠骨髓瘤細胞係）

P3/NSI/1-Ag4-1（NS-1）是小鼠骨髓瘤細胞P3X63Ag8的一個(ge) 不分泌克隆。

NS1細胞株對0.1 mM 8-氮鳥嘌呤表現出抗性，但在HAT（含有次黃嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶的）培養(yang) 基中無法生長。

NS-1細胞特性特征

• Kappa鏈合成但不分泌：NS1細胞能夠合成Kappa輕鏈，但不會(hui) 將其分泌到細胞外.
  

• 膽固醇營養(yang) 缺陷：由於(yu) 3-酮類固醇還原酶活性不足，NS1細胞是膽固醇營養(yang) 缺陷型.

• 抗原表達：NS1細胞表達H-2d抗原.
  

• 免疫球蛋白表達：表達非分泌型免疫球蛋白.

• 基因特征：H-2d基因表達、免疫球蛋白基因表達（非分泌型）.

• 不分泌克隆：是P3X63Ag8細胞的一個(ge) 不分泌克隆.

• 突變株：由於(yu) 缺失了3-酮類固醇還原酶活性而形成的突變株.

• 經檢測，NS1細胞鼠痘病毒呈陰性

NS-1小鼠骨髓瘤細胞參數表

NS-1小鼠骨髓瘤細胞培養教程

細胞傳代

• 當 NS-1 細胞密度達到 1-2 × 10⁶ 細胞/mL 時進行傳(chuan) 代。

• 通常每 2-3 天傳(chuan) 代一次，具體(ti) 頻率根據 NS-1 細胞生長情況調整。

• 傳(chuan) 代比例一般為(wei) 1:5 至 1:10。

細胞計數與活力檢測

• 使用血球計數板和台盼藍染色法檢測 NS-1 細胞的數量和活力。

• 確保 NS-1 細胞活力保持在 90% 以上。

培養瓶選擇

• 使用懸浮培養(yang) 瓶或細胞培養(yang) 袋，確保有足夠的氣體(ti) 交換空間。

培養基更換

• 每 2-3 天更換一半培養(yang) 基，或根據 NS-1 細胞的生長情況調整。

• 離心收集細胞（200g，5分鍾），棄去上清液，重懸於(yu) 新鮮培養(yang) 基中。

注意事項

• 定期檢查 NS-1 細胞的形態，確保細胞呈圓形或卵圓形，無明顯碎片。

• 避免 NS-1 細胞過度生長，保持在對數生長期。

• 定期進行無菌檢測，確保 NS-1 細胞培養(yang) 環境無汙染。

凍存與複蘇

• 凍存：使用含 10% DMSO 的完全培養(yang) 基，緩慢降溫至 -80°C 後轉移至液氮中長期保存 NS-1 細胞。

• 複蘇：快速解凍 NS-1 細胞後，緩慢稀釋並逐步適應培養(yang) 條件，以提高細胞存活率。

特殊注意事項

• 由於(yu) NS-1 細胞對膽固醇存在營養(yang) 缺陷，可能需要在培養(yang) 基中補充膽固醇或使用特殊的血清替代物。

常見問題及關鍵步驟

• 汙染問題：NS-1 細胞培養(yang) 過程中容易受到細菌、真菌或病毒汙染。應確保無菌操作，使用滅菌器具和培養(yang) 基。

• 細胞密度問題：NS-1 細胞密度過高可能導致死亡和形態變化，過低則影響生長。應保持適宜密度（1-2 × 10⁵ 細胞/mL）。

• 培養(yang) 基更換不及時：細胞培養(yang) 基中的營養(yang) 物質會(hui) 隨著 NS-1 細胞生長而耗盡，廢物積累可能抑製細胞生長。建議每 2-3 天更換一半培養(yang) 基。

• 溫度和 CO₂ 濃度不穩定：NS-1 細胞的培養(yang) 環境的溫度和 CO₂ 濃度應保持穩定。37°C 和 5% CO₂ 是最佳條件。溫度波動可能影響細胞的生長和活力。

• 凍存和複蘇不當：凍存 NS-1 細胞時應使用合適的冷凍保護劑（如 DMSO），並緩慢降溫；複蘇時應快速解凍並逐步稀釋，以提高細胞存活率。

• 培養成功的關鍵步驟

• 無菌操作：在整個(ge) NS-1 細胞培養(yang) 過程中，保持無菌環境，使用滅菌器具，避免交叉汙染。

• 適宜的培養(yang) 基：使用 RPMI 1640 培養(yang) 基，並添加 10-20% 胎牛血清，根據需要添加抗生素。

• 適宜的培養(yang) 條件：確保 NS-1 細胞培養(yang) 溫度為(wei) 37°C，CO₂ 濃度為(wei) 5%，並維持適當的濕度。

• 定期監測和傳(chuan) 代：定期檢查 NS-1 細胞的形態和生長情況，及時傳(chuan) 代，避免細胞過度生長。

• 細胞計數和活力檢測：使用血球計數板和台盼藍染色法定期檢測 NS-1 細胞的數量和活力，確保細胞健康。

• 凍存和複蘇技術：凍存 NS-1 細胞時使用適當的冷凍保護劑，複蘇時快速解凍並逐步適應培養(yang) 條件，以提高存活率。