MB49細胞（小鼠膀胱癌細胞）

MB49細胞源自C57BL/Icrf-a(t)小鼠膀胱上皮細胞，經過7,12-二甲基苯並[a]蒽（DMBA）單次24小時處理後轉化而來。

MB49細胞特性特征

• 遺傳(chuan) 特征：MB49細胞雖源自雄性小鼠，但100%的細胞中Y染色體(ti) 丟(diu) 失，這種異常在人類膀胱癌早期培養(yang) 中也常見

• 腫瘤形成能力：MB49細胞移植到同基因小鼠中能產(chan) 生癌症、在小鼠中植入後，雄性小鼠的腫瘤明顯大於(yu) 雌性小鼠，體(ti) 現了膀胱腫瘤生長的性別差異

• 激素反應性：對二氫睾酮(DHT)敏感，MB49細胞表現出劑量依賴的增殖增強、對妊娠激素和人絨毛膜促性腺激素(hCG)無反應

• 免疫相關(guan) 特征：MHC I類和II類分子表達低或無表達、經IFN-gamma處理後，MHC I類和II類分子表達顯著上調

MB49細胞參數表

MB49小鼠膀胱癌細胞培養教程

MB49細胞複蘇

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存管，立即放入37°C水浴中輕輕搖晃解凍，時間為(wei) 1-2分鍾，直至完全解凍。
  

• 用75%酒精擦拭MB49細胞凍存管外表麵，確保無菌操作。

• 將解凍後的MB49細胞懸液轉移到離心管中，加入4mL預熱的培養(yang) 基（DMEM + 10% FBS + 1% P/S），混合均勻。
  

• 以1000 rpm離心3-4分鍾，棄去上清液。

• 加入1-2mL培養(yang) 基重懸MB49細胞，輕輕吹打混勻。
  

• 將MB49細胞懸液轉移到T25培養(yang) 瓶中，加入適量的培養(yang) 基（總量10-12mL），置於(yu) 37°C、5% CO2培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。

• 第二天換液，檢查MB49細胞密度和狀態，確保細胞良好貼壁生長。
  

MB49細胞傳代

• 傳(chuan) 代密度：當MB49細胞密度達80%-90%時進行傳(chuan) 代。

• 建議按1:2至1:4比例傳(chuan) 代，具體(ti) 取決(jue) 於(yu) MB49細胞的生長速度及密度。
  

• 棄去培養(yang) 上清，用無鈣、無鎂的PBS潤洗MB49細胞1-2次。
  

• 加入1mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，使消化液均勻覆蓋所有MB49細胞。

• 棄去消化液，將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，觀察MB49細胞消化情況，當細胞大部分變圓並脫落時，迅速取出。

• 輕敲幾下培養(yang) 瓶，加入少量培養(yang) 基終止消化。

• 按6-8mL/瓶補加培養(yang) 基，輕輕混勻後裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4分鍾，棄去上清液。

• 補加1-2mL培養(yang) 基重懸MB49細胞，將細胞懸液按1:2比例分到新的含8mL培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

MB49細胞凍存

• 準備工作：當MB49細胞生長狀態良好時，可以進行細胞凍存。

• 棄去培養(yang) 基，用PBS清洗MB49細胞一次，加入1mL胰酶消化，細胞變圓脫落後，加入1mL含血清的培養(yang) 基終止消化。
  

• 使用血球計數板計數MB49細胞，4分鍾1000 rpm離心去除上清。

• 加入1mL血清重懸MB49細胞，根據細胞數量加入血清和DMSO，輕輕混勻，確保DMSO終濃度為(wei) 10%，細胞密度不低於(yu) 1x10^6/ml。

• 每支凍存管凍存1mL MB49細胞懸液，並做好標識。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80°C冰箱預凍2小時後轉入液氮罐長期保存。