Panc 10.05人胰腺癌細胞

Panc 10.05是一種人胰腺癌上皮細胞係，最初於(yu) 1992年從(cong) 一名患有腺癌的白人男性成年患者的胰腺中分離。與(yu) 之相關(guan) 的PL45細胞係也源自同一患者。兩(liang) 種細胞都表現出K-ras癌基因的突變。

Panc 10.05人胰腺癌細胞特性特征

• 基因突變:K-ras癌基因突變：密碼子12處GGT->GAT，導致甘氨酸被天冬氨酸替代
  

• 致瘤性:Panc 10.05細胞能在裸小鼠或SCID小鼠體(ti) 內(nei) 形成腫瘤

• 抗原表達:MHC I類抗原：陽性、MHC II類抗原：陰性

• 蛋白表達:細胞角蛋白7（Cytokeratin 7）、細胞角蛋白18（Cytokeratin 18）

• Panc 10.05鍍覆效率: 約40%
  

• 相關(guan) 細胞係: PL45細胞係，源自同一患者，具有相同的K-ras突變

Panc 10.05人胰腺癌細胞參數表

Panc 10.05人胰腺癌細胞培養教程

細胞複蘇

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的PANC1005細胞小瓶，並立即在37°C水浴中快速搖動，確保在1分鍾內(nei) 完成解凍。
  

• 解凍後，用70%乙醇擦拭PANC1005細胞小瓶表麵進行消毒。

• 將PANC1005細胞小瓶內(nei) 容物轉移到含有9.0 mL完全培養(yang) 基的離心管中。
  

• 以125 xg離心5至7分鍾以去除DMSO。

• 用推薦的完全培養(yang) 基重懸PANC1005細胞沉澱。
  

• 將PANC1005細胞分配到25 cm²或75 cm²的培養(yang) 瓶中。

細胞培養

• 使用RPMI-1640培養(yang) 基，添加100 µg/mL胰島素、15%胎牛血清（FBS）和1%青黴素/鏈黴素（P/S），適合PANC1005細胞生長。
  

• 將PANC1005細胞培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO₂的培養(yang) 箱中。
  

• 每2至3天更換一次培養(yang) 基，以維持PANC1005細胞的最佳生長條件。
  

細胞傳代

• 推薦PANC1005細胞的傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2至1:4。
  

• 取出並丟(diu) 棄舊培養(yang) 基。
  

• 用0.25% (w/v) 胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液短暫衝(chong) 洗PANC1005細胞層，確保去除所有含有胰蛋白酶抑製劑的血清痕跡。

• 加入2.0至3.0 mL胰蛋白酶-EDTA溶液，觀察直至PANC1005細胞層分散（通常在5至15分鍾內(nei) ）。

• 添加6.0至8.0 mL完全培養(yang) 基，通過輕輕移液吸出PANC1005細胞。

• 將適當等份的細胞懸液添加到新的培養(yang) 容器中並在37°C下孵育。

細胞凍存

• 收集PANC1005細胞並用培養(yang) 基重懸。
  

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄上清。

• 用凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸PANC1005細胞至1×10^6 cells/mL。

• 將PANC1005細胞懸液分裝至凍存管中，逐步降溫至-80°C，然後轉移至液氮罐中長期保存。

注意事項

• 無菌操作：所有操作均需在嚴(yan) 格的無菌條件下進行，以防PANC1005細胞汙染。

• pH值控製：在PANC1005細胞回收過程中，避免培養(yang) 基堿度過高。建議在添加細胞前，將含有完全生長培養(yang) 基的培養(yang) 容器在培養(yang) 箱中預熱至少15分鍾，使培養(yang) 基達到正常pH值（7.0至7.6）。

• 細胞監測：定期觀察、拍照，並記錄PANC1005細胞生長狀態。

• 檢測支原體(ti) 等潛在汙染。

• 細胞密度：接種密度應保持在1×10^6 cells/T25培養(yang) 瓶左右，以確保PANC1005細胞的良好生長。

• 細胞複蘇：快速解凍PANC1005細胞並在1分鍾內(nei) 完成；解凍後立即用培養(yang) 基稀釋PANC1005細胞以減少DMSO毒性。

• 細胞凍存：使用含10% DMSO的凍存液以提高PANC1005細胞存活率；采用程序降溫方式凍存PANC1005細胞。