4T1乳腺癌細胞係 （小鼠乳腺癌細胞）

4T1小鼠乳腺癌細胞在BALB/c小鼠中的腫瘤生長和轉移擴散非常接近人類乳腺癌症。該腫瘤來源的細胞係是第IV階段人類癌症的動物模型。4T1誘導的腫瘤既可用作術後模型也可用作非手術模型，因為(wei) 4T1誘導腫瘤在兩(liang) 個(ge) 模型中以相似的動力學自發轉移。

4T1細胞具有致瘤性，在BALB/c小鼠中形成腫瘤和轉移。

當注射到BALB/c小鼠中時，4T1細胞會(hui) 自發產(chan) 生高度轉移的腫瘤，這些腫瘤可以轉移到肺、肝、淋巴結和大腦，而原發腫瘤正在原位生長。原發性腫瘤不必切除以誘導轉移性生長。

由於(yu) 4T1細胞對6-硫泉堿具有耐藥性，因此在許多遠處器官中可以檢測到微轉移細胞（少至1個(ge) ），其準確性比大多數腫瘤模型都高。無需對結節進行計數或對靶器官進行稱重。

4T1細胞簡介

• 4T1是小鼠乳腺癌細胞係，常用於(yu) 研究人類乳腺癌的體(ti) 外模型。

• 具有高度的侵襲性和腫瘤形成能力，常從(cong) 原發腫瘤轉移到其他部位。

• 適用於(yu) 研究乳腺癌轉移的理想選擇。

4T1細胞特征

• 來源於(yu) BALB/c小鼠的自發性乳腺腫瘤，模擬人類三陰性乳腺癌。

• 4T1細胞具有高轉移能力，在肺、肝、淋巴結和大腦等器官形成腫瘤。

• 建立了與(yu) 人類乳腺癌Ⅵ期相似的動物模型，適用於(yu) 手術後及未手術模型。

• 免疫原性低，模擬人體(ti) 乳腺癌的生長和轉移特性。

4T1細胞重點突出

• 4T1細胞在模擬人類乳腺癌方麵具有高度的相似性。

• 適用於(yu) 手術後及未手術模型的建立，以及微小轉移細胞的檢測。

4T1細胞參數表

4T1細胞培養日記

實驗準備：

• 提前開啟紫外燈照射30分鍾消毒滅菌，工作台通風10分鍾。

• 使用75%酒精擦拭台麵，確保清潔。

器材及試劑：

• 器材：玻璃瓶、培養(yang) 瓶、培養(yang) 皿、巴士管、離心管、移液槍、槍頭（白色0-10ul；黃色20-200ul；藍色100-1000ul）、濾器、吸管、多孔培養(yang) 皿、6cm皿、10cm皿等。

• 試劑：DMEM培養(yang) 液、緩衝(chong) 液、PBS、消化液、血清、抗生素。

細胞培養條件：

• 形態特征：上皮細胞樣，貼壁生長。

• 培養(yang) 基：90% DMEM + 10% FBS + PS。

• 生長條件：氣相：95%空氣 + 5%二氧化碳；溫度：37°C。

• 傳(chuan) 代方法：1:2至1:3，每周3次。

• 凍存條件：無血清凍存液（或者冷凍保存液：90%血清，10% DMSO），液氮儲(chu) 存。

養護注意事項：

• 運輸所使用的培養(yang) 基不能再次用於(yu) 培養(yang) 細胞，需使用新配製的完全培養(yang) 基。

• 第一次傳(chuan) 代建議1：2傳(chuan) 代，注意1:2傳(chuan) 代是指1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) T25瓶或者2個(ge) 6cm皿，而非1個(ge) T25瓶傳(chuan) 2個(ge) 10cm皿。

養護操作步驟

細胞複蘇：

• 在37°C水浴中快速搖晃解凍含有1 mL 4T1細胞懸液的凍存管，加入4 mL培養(yang) 基混合均勻。

• 在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加入1-2 mL培養(yang) 基後輕輕吹勻。

• 將所有4T1細胞懸液加入含適量培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜。

細胞傳代

• 棄去培養(yang) 上清，用PBS潤洗細胞1-2次。

• 加入1 mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA）於(yu) 培養(yang) 瓶中，37°C培養(yang) 箱中消化1-3 min。

• 觀察細胞消化情況，迅速終止消化並補加2-3 mL完全培養(yang) 基。

• 離心後，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yang) 基後吹勻。

• 將細胞懸液按1:2比例分到新的培養(yang) 瓶中，置於(yu) 培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞凍存：

• 收集4T1細胞懸液，離心後用PBS清洗並計數。

• 根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL。

• 將凍存管放入-80℃冰箱，24 h後轉入液氮灌儲(chu) 存。

典型問題及解決方案：

• 細胞不長：檢查培養(yang) 基、操作力度和細胞密度。

• 細胞形態特征：上皮細胞樣，貼壁生長。

• 使用高糖DMEM：是的，使用高糖DMEM。

• 細胞是否能成瘤：是，能在BALB/c小鼠中形成腫瘤並轉移。

• 傳(chuan) 代密度：建議在細胞生長至80%匯合度時傳(chuan) 代。

• 出現小黑點：觀察黑點形態和運動性，根據情況處理。