MKN74細胞（人胃癌細胞）

MKN74 是一種人胃癌細胞係，最初由日本國立癌症研究所從(cong) 一名37歲男性患者的肝轉移病灶中分離，患者罹患的是中分化管狀腺癌。MKN74細胞具有與(yu) 腸道分化相關(guan) 的形態學特征，包括在體(ti) 外及裸鼠模型中觀察到的細胞極性和具有核心絲(si) 的微絨毛。
MKN74細胞在形態上表現為(wei) 上皮樣細胞，具有慢生長特性。最初呈現為(wei) 近二倍體(ti) ，在多代傳(chuan) 代培養(yang) 後，染色體(ti) 數量發生了變化。MKN74細胞來自日本細胞資源中心（JCRB），可用於(yu) 胃癌發病機製研究和胃癌幹細胞研究。

MKN74細胞特性特征

• p53基因狀態：MKN74細胞通常具有野生型p53，但一些報告表明p53基因中存在點突變（I251L）、RUNX3 mRNA表達缺失。

• SNCG基因表達：MKN74細胞表達突觸核蛋白γ（SNCG）基因，該基因已被證明能刺激癌症細胞增殖和轉移。

• MKN74細胞通過無血清懸浮培養(yang) 可獲得腫瘤細胞球。

• MKN74細胞曾經感染支原體(ti) 並通過MC-210消除支原體(ti)

• MKN74細胞對EBV、HBV、HIV-1和HIV-2均為(wei) 陰性
  

MKN74細胞參數表

MKN74人胃癌細胞培養教程

MKN74細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存的MKN74細胞凍存管，迅速將其置於(yu) 37℃的水浴中搖晃解凍，解凍過程應在1-2分鍾內(nei) 完成。
  

• 解凍後，立即向凍存管中加入4 mL預溫的完全培養(yang) 基，輕輕混勻以確保MKN74細胞均勻分布。

• 將MKN74細胞懸液在1000 RPM下離心4分鍾，棄去上清液。

• 補加1-2 mL培養(yang) 基，充分混勻後將MKN74細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基（約8 mL），並將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。

• 第二天更換新鮮培養(yang) 基，並檢查MKN74細胞的生長狀態和密度。

MKN74細胞傳代

• 當MKN74細胞覆蓋培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿底麵積的80%-90%時，可以進行傳(chuan) 代操作。
  

• 棄去培養(yang) 基，用無鈣鎂的PBS緩衝(chong) 液輕輕洗滌MKN74細胞1-2次，以去除殘留的血清成分。
  

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中消化1-2分鍾，期間使用顯微鏡觀察MKN74細胞的消化進程。

• 當MKN74細胞大部分變圓且脫落時，迅速將培養(yang) 瓶取回操作台，輕敲培養(yang) 瓶幾下以幫助MKN74細胞完全脫離。

• 加入少量預溫的培養(yang) 基中和胰蛋白酶，然後將MKN74細胞懸液輕輕混勻。

• 在1000 RPM下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yang) 基後重新懸浮MKN74細胞。

• 按1:2的比例將MKN74細胞懸液分至新的培養(yang) 瓶中，並補充8 mL新鮮培養(yang) 基，繼續培養(yang) 。

MKN74細胞凍存

• 當MKN74細胞生長狀態良好，且密度適宜時，可進行凍存操作。
  

• 棄去培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，用PBS洗滌一次後，加入1 mL胰蛋白酶消化MKN74細胞。
  

• 當MKN74細胞變圓脫落後，加入1 mL含血清的培養(yang) 基終止消化。

• 使用血球計數板計數MKN74細胞數量，確保細胞密度不低於(yu) 1×10⁶ cells/mL。

• 以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清液，加入1 mL血清重懸MKN74細胞，根據細胞數量加入適量的血清和DMSO，使DMSO的終濃度達到10%。

• 將1 mL MKN74細胞懸液分裝到凍存管中，做好標記。

• 將凍存管放置於(yu) 程序降溫盒中，置於(yu) -80℃冰箱中預凍約2小時後，再轉入液氮罐中長期保存。