T47D細胞（人乳腺管癌細胞）

T47D人乳腺導管癌細胞係源自54歲女性患者（患有乳腺浸潤性導管癌）的胸腔積液中分離的上皮細胞。T47D細胞係自1979年由I. Keydar首次分離，廣泛應用於(yu) 癌症研究。

T-47D細胞屬於(yu) 亞(ya) 二倍體(ti) 人類細胞係，其模式染色體(ti) 數為(wei) 65，出現率為(wei) 50%，多倍體(ti) 率為(wei) 0.8%。大多數細胞含有18條標記染色體(ti) ，其中7條為(wei) 成對存在，而11條為(wei) 單拷貝。常見的標記染色體(ti) 包括t(8q14q)、t(9q17q)和t(10q17p)等。T47D細胞缺乏正常的N7、N9和N10染色體(ti) ，但通常具有4個(ge) N11拷貝。染色體(ti) 顯帶分析未顯示Y染色體(ti) 的存在，而雙微體(ti) （DM）雖出現，但頻率很低。

T47D細胞特征特性

• 雌激素受體(ti) 陽性（ER+）：表達雌激素受體(ti) ，對雌激素敏感。
  

• 孕酮受體(ti) 陽性（PR+）：表達孕酮受體(ti) 。

• 雄激素受體(ti) 陽性（AR+）：表達雄激素受體(ti) 。

• 糖皮質激素受體(ti) 陽性：表達糖皮質激素受體(ti) 。

• 降鈣素表達：細胞表達降鈣素及其受體(ti) 。

• 催乳素表達：細胞表達催乳素。

• WNT7B癌基因表達：表達WNT7B癌基因，可能與(yu) 其惡性特性相關(guan) 。

• 生長特性：貼壁生長，形態為(wei) 上皮細胞樣。

• 致瘤性：T47D細胞能在軟瓊脂中形成菌落。

• 轉移性：源自胸腔積液，具有轉移潛能。

• 同工酶譜：AK-1，1；ES-D，2；G6PD，B；GLO-I，1-2；PGM1，1；PGM3，1

• 分化的T-47D上皮細胞含有17-β-雌二醇、其他類固醇和降鈣素的細胞質連接和受體(ti) 。
  

T47D細胞參數表

T-47D人乳腺管癌細胞培養教程

T-47D細胞接收後的處理

• 消毒：收到T-47D細胞後，用75%酒精消毒培養(yang) 瓶外壁。

• 靜置：將T25培養(yang) 瓶放置在37℃的培養(yang) 箱中約2-3小時。

• 檢查：用4X或5X顯微鏡檢查T-47D細胞狀態，並拍攝細胞狀態照片（10X、20X各2-3張）及培養(yang) 瓶外觀照片。若發現培養(yang) 瓶破損、液體(ti) 溢出或T-47D細胞汙染，請及時拍照並聯係供應商。

• 觀察貼壁情況：在顯微鏡下觀察T-47D細胞生長和貼壁情況。若細胞密度低於(yu) 60%，則去除培養(yang) 瓶中的培養(yang) 基，離心回收未貼壁的T-47D細胞，重懸後加入6-8mL新配製的完全培養(yang) 基繼續培養(yang) 。若細胞密度達到70%-80%，則進行傳(chuan) 代處理。

T-47D細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出T-47D細胞凍存管，迅速置於(yu) 37℃水浴中搖晃解凍至冰塊完全融化。

• 用75%酒精消毒凍存管外壁，並置於(yu) 超淨台中操作。

• 將T-47D細胞懸液轉移到含9mL預熱完全培養(yang) 基的15mL離心管中，1000rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，加入1mL預熱完全培養(yang) 基重懸T-47D細胞，轉移到T25培養(yang) 瓶中，並補充完全培養(yang) 基至5mL。

• 將T-47D細胞培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中，24小時後更換新鮮培養(yang) 基。

T-47D細胞傳代

• 當T-47D細胞密度達到70%-80%時，準備進行傳(chuan) 代。

• 吸去培養(yang) 基，並用PBS輕輕洗滌T-47D細胞一次。

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液，37℃孵育約3-5分鍾，觀察T-47D細胞脫落情況。

• 加入預熱的完全培養(yang) 基終止消化，並輕輕吹打T-47D細胞使其完全脫落。

• 將T-47D細胞懸液轉移至15mL離心管中，1000rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，加入適量完全培養(yang) 基重懸T-47D細胞，按1:2至1:4比例接種到新的培養(yang) 瓶中。

• 補充完全培養(yang) 基至適量，將T-47D細胞培養(yang) 瓶置於(yu) 培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

T-47D細胞凍存

• 當T-47D細胞生長良好且密度適宜時，進行凍存。

• 吸去培養(yang) 基，並用PBS輕輕洗滌T-47D細胞一次。

• 加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液，37℃孵育約3-5分鍾，觀察T-47D細胞脫落情況。

• 加入預熱的完全培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打T-47D細胞使其完全脫落。

• 將T-47D細胞懸液轉移至15mL離心管中，1000rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，加入凍存液（90%完全培養(yang) 基+10%DMSO）重懸T-47D細胞。

• 將T-47D細胞懸液分裝到凍存管中，每管1mL。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，-80℃預凍過夜後轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• 傳(chuan) 代前48小時內(nei) ，T-47D細胞多為(wei) 圓形發亮狀態，培養(yang) 基顏色變化不明顯時避免移動細胞。

• 收到T-47D細胞後，運輸用培養(yang) 基不能再用來培養(yang) 細胞，需更換新配製的完全培養(yang) 基。

• 初次傳(chuan) 代建議使用1:2比例進行。

• T-47D細胞對激素非常敏感，需注意培養(yang) 過程中對雌激素和抗雌激素的反應。

常見問題

• 貼壁緩慢：T-47D細胞在傳(chuan) 代前期貼壁和展開時間較長，需耐心觀察。

• 生長速度變化：傳(chuan) 代初期T-47D細胞生長速度可能較慢，48小時後貼壁牢固後生長加快。

• 運輸影響：運輸過程可能導致T-47D細胞脫落或成團，需進行離心回收。

• 培養(yang) 基變化不敏感：T-47D細胞的培養(yang) 基顏色變化不明顯，需通過顯微鏡確認細胞狀態。