ncih520細胞（人肺鱗癌細胞）

NCI-H520人肺鱗癌細胞是源自男性鱗狀細胞癌患者肺組織中分離出的細胞，由Gazdar AF等研究人員於(yu) 1982年建立。

ncih520細胞是一種亞(ya) 二倍體(ti) 人類細胞係，其模式染色體(ti) 數目為(wei) 58，占30%。細胞中存在高倍性頻率（3.2%），並具有30多條標記染色體(ti) ，其中包括1q+、t（1q8q）、2q+、der（16）t（3；16）（q21；q22）、der（19）t（13；19）（q22；q13）和der（5）t（5；5）（p15pq13）等

ncih520細胞特性特征

• p53 mRNA表達：NCI-H520細胞的p53 mRNA表達水平較正常肺組織低，但沒有明顯的DNA結構異常

• 角蛋白和波形蛋白呈陽性表達

• 神經絲(si) 三聯蛋白呈陰性表達

• ncih520細胞係可以在軟瓊脂中克隆（有或沒有血清）。
  

• 致瘤性：在裸鼠皮下接種1×10^7個(ge) 細胞後，21天內(nei) 可100%形成腫瘤（5/5）

• 同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，0；PGM1，1；PGM3，1
  

ncih520細胞參數表

ncih520人肺鱗癌細胞培養教程

細胞複蘇

• 準備工作：將完全培養(yang) 液（90% RPMI-1640 + 10% FBS）在37℃水浴鍋中預熱30分鍾。

• 從(cong) 液氮中取出NCI-H520細胞，放入-80℃冰箱，讓殘餘(yu) 液氮揮發。

• 在超淨台內(nei) ，用吸管吸取6-7 mL預熱的完全培養(yang) 液到15 mL離心管中。

• 將NCI-H520細胞凍存管在37℃水浴鍋中快速解凍（約1-2分鍾），直到內(nei) 容物大部分融化。

• 將解凍的NCI-H520細胞懸液轉移到含有預熱培養(yang) 液的15 mL離心管中。

• 800-1000 rpm離心3-5分鍾，棄上清。

• 用1 mL新鮮完全培養(yang) 液重懸NCI-H520細胞沉澱。

• 將NCI-H520細胞懸液轉移到含4 mL完全培養(yang) 液的T25 cm²培養(yang) 瓶（或6 cm培養(yang) 皿）中。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃，5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。

細胞傳代

• 當NCI-H520細胞匯合度達到80-90%時進行傳(chuan) 代。

• 棄去培養(yang) 基，用PBS輕柔清洗NCI-H520細胞1-2次。

• 加入適量胰酶（0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液），37℃消化2-5分鍾。

• 顯微鏡下觀察NCI-H520細胞變圓並開始脫落時，加入含血清的完全培養(yang) 基終止消化。

• 吹打NCI-H520細胞，製成單細胞懸液。

• 按1:3-1:4的比例將NCI-H520細胞接種到新的培養(yang) 瓶中。

日常培養維護

• 培養(yang) 條件：37℃，5% CO₂培養(yang) 箱。

• 培養(yang) 基：90% RPMI-1640 + 10% FBS（可根據需要添加雙抗）。

• 換液頻率：每2-3天更換一次培養(yang) 基。

• 觀察：每天觀察NCI-H520細胞生長狀態、形態和密度。

注意事項

• 首次傳(chuan) 代時建議使用1:3的比例。根據NCI-H520細胞生長速度調整傳(chuan) 代比例。

• 細胞倍增時間約為(wei) 32-60小時，請根據實際生長情況安排傳(chuan) 代時間。

• 操作過程中保持無菌操作，所有器具和試劑需提前消毒。

• 定期進行NCI-H520細胞汙染檢測，確保細胞質量。

凍存

• 凍存液配方：50% RPMI-1640 + 40% FBS + 10% DMSO。

• 將NCI-H520細胞懸浮在凍存液中，每管約1-2×10⁶細胞。

• 使用程序降溫盒或梯度降溫，最終將NCI-H520細胞保存在液氮中。

培養建議和注意事項

• 確保每天觀察NCI-H520細胞形態和密度，保持細胞呈現正常的上皮細胞樣、多角形形態。

• 保持適當的培養(yang) 條件：37℃，5% CO₂，70-80%濕度。

• 定期更換培養(yang) 基，通常每2-3天更換一次。

• 避免NCI-H520細胞過度生長，當細胞密度達到80-90%時及時傳(chuan) 代。

傳代技巧

• 首次傳(chuan) 代建議使用1:3的比例，根據NCI-H520細胞生長速度調整傳(chuan) 代比例。

• 避免使用運輸用的灌液培養(yang) 基繼續培養(yang) 細胞，應換用新配製的完全培養(yang) 基。

• 避免NCI-H520細胞過度消化，消化時間通常為(wei) 1-2分鍾，觀察細胞狀態及時終止。

• 定期進行NCI-H520細胞汙染檢測，確保細胞質量。