J82細胞（人膀胱移行細胞癌）

J82細胞係是一種人類膀胱移行細胞癌細胞係，來源於(yu) 一位58歲的白種男性患者。J82細胞具有上皮細胞樣的形態特征，貼壁生長。在電鏡下觀察，J82細胞顯示出豐(feng) 富的粗麵內(nei) 質網和突出的微絲(si) 結構，但未發現橋粒的存在。

J82細胞的染色體(ti) 組成非整倍體(ti) ，染色體(ti) 計數廣泛分布在三倍體(ti) 範圍內(nei) ，具有多樣化的染色體(ti) 異常，包括標記性染色體(ti) 的存在。這些標記染色體(ti) 包括但不限於(yu) 20q+、11q+、8p+、del（1）（q31）、5p+（HSR），其中20q與(yu) C.O’Toole等人研究中的標記染色體(ti) M1相同，其餘(yu) 部分與(yu) 原始標記染色體(ti) 的相關(guan) 性較低。

J82細胞特性

• J82細胞在裸鼠中具有致瘤性。
  

• J82細胞表達多種人類白細胞抗原（HLA），具體(ti) 包括：HLA A2、HLA Aw32、HLA B5、HLA B12、HLA Cw5
  

• 血型：J82細胞的血型為(wei) A型。

• 同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，1-2；PGM1，1；PGM3，2。

• J82細胞細胞內(nei) 部結構：電鏡檢查無橋粒、具有大量粗麵內(nei) 質網和突出的微絲(si) 。

• J82細胞可以表達ras基因。Ras基因是一種重要的原癌基因，其異常表達與(yu) 多種癌症的發生發展有關(guan) 。

J82細胞參數表

J82細胞人膀胱移行細胞癌培養教程

J82細胞傳代步驟

• 吸出J82細胞原培養(yang) 液。

• 加入約2mL PBS，輕輕晃動培養(yang) 瓶潤洗J82細胞，吸出PBS丟(diu) 棄。

• 加入約1mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養(yang) 瓶使之浸潤所有J82細胞。

• 將培養(yang) 瓶放入培養(yang) 箱消化，顯微鏡下觀察，當J82細胞變圓且出現間隙時終止消化。

• 加入3mL含血清的培養(yang) 基終止消化，吹打J82細胞使其脫壁並呈單細胞懸液。

• 收集J82細胞懸液，離心（1200rpm/min，3分鍾），吸出上清丟(diu) 棄。

• 加入新鮮培養(yang) 基，吹打混勻J82細胞，按比例接種到新培養(yang) 瓶，補足培養(yang) 基。

• 擰鬆瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yang) 。

J82細胞複蘇

• 從(cong) 液氮或-80°C冰箱中取出凍存J82細胞，在37°C水浴中快速解凍（約1分鍾）。

• 將解凍的J82細胞懸液轉移到含5ml預熱完全培養(yang) 基的15ml離心管中。

• 1000rpm離心5分鍾。

• 棄上清，用2ml完全培養(yang) 基重懸J82細胞。

• 將J82細胞懸液轉移到T25培養(yang) 瓶中，補充適量培養(yang) 基。

• 放入37°C，5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 。

• 24小時後觀察J82細胞貼壁情況，更換新鮮培養(yang) 基。

常見問題與解決方法

• 細胞貼壁問題：
  運輸過程中可能發生J82細胞脫落，靜置後可恢複貼壁。若J82細胞脫落或抱團，可將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C培養(yang) 箱中2-3小時後重新接種。

• 培養(yang) 基問題：
  運輸用的培養(yang) 基不宜再次用來培養(yang) J82細胞，應按照說明書(shu) 新配置完全培養(yang) 基。

• 細胞汙染：
  收到J82細胞後用75%酒精對培養(yang) 瓶表麵消毒，定期檢查J82細胞是否有汙染跡象。

• 細胞生長狀態不佳：
  可能由於(yu) 培養(yang) 條件不適或傳(chuan) 代次數過多，確保使用正確的培養(yang) 基和培養(yang) 條件，定期觀察J82細胞形態和生長速率。

• 細胞密度問題：
  過高或過低的細胞密度都會(hui) 影響J82細胞生長，J82細胞生長到80%-90%匯合度時進行傳(chuan) 代，推薦傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2-1:4。

• 細胞鑒定問題：
  長期培養(yang) 可能導致J82細胞特性變化，定期進行STR鑒定，確保J82細胞的遺傳(chuan) 穩定性。

• 凍存和複蘇問題：
  不當的凍存和複蘇操作可能導致J82細胞活力下降，嚴(yan) 格按照凍存和複蘇流程操作，使用正確的凍存液（55% 基礎培養(yang) 基+40%FBS+5%DMSO）。

• 細胞形態變化：
  長期培養(yang) 可能導致J82細胞形態變化，定期觀察J82細胞形態，如有明顯變化，考慮使用低傳(chuan) 代次數的J82細胞。