RLE-6TN細胞（大鼠肺泡Ⅱ型細胞）

RLE-6TN細胞係源自56日齡雄性FISCHER 344 (F344) 大鼠的肺泡Ⅱ型細胞，通過鏈黴蛋白酶溶液對氣道進行灌注，從(cong) 肺中成功分離。RLE-6TN細胞係在傳(chuan) 代至第5代時，以脂質體(ti) 介導的轉染方法將SV40 (pRSV-T DNA) 導入細胞中。盡管引入了SV40，但核免疫染色和PCR檢測顯示，細胞中並未檢測到SV40-T抗原，表明細胞實現了自發的永生化，而非依賴外源性SV40基因的長期表達。永生法: SV40大T抗原轉化

RLE-6TN細胞特性特征

• 核型穩定性：從(cong) 第19代到第70代，RLE-6TN細胞保持接近二倍體(ti) ，50%或更多的細胞含有42條染色體(ti) ，並在第37代時觀察到1號染色體(ti) 和15號染色體(ti) 之間的易位。
  

• 細胞角蛋白：表達細胞角蛋白8和19，這些是肺泡Ⅱ型細胞的標誌性蛋白。
  

• 脂質包涵體(ti) ：RLE-6TN細胞含有脂質包涵體(ti) ，可以通過磷化氫3R染色和電子顯微鏡進行確認。

• 堿性磷酸酶：RLE-6TN細胞不表達堿性磷酸酶活性，這一特征有助於(yu) 區分其與(yu) 其他類型的肺泡細胞。
  

• RLE-6TN細胞對幾種趨化因子的表達與(yu) 原代培養(yang) 的肺泡Ⅱ型細胞相似，這表明其在功能上可能保留了kaiyun网站安全的一些特征。
  

• 致瘤性：RLE-6TN細胞在裸鼠中注射後不會(hui) 致瘤，顯示出其安全性和應用潛力。

• 盡管RLE-6TN細胞不表達SV40-T抗原，仍需將其視為(wei) 潛在的生物危害材料進行嚴(yan) 格管理。
  

RLE-6TN細胞參數表

RLE-6TN大鼠肺泡Ⅱ型細胞培養教程

凍存的RLE6TN細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮罐中取出RLE6TN細胞凍存管，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動，在30-60秒內(nei) 使RLE6TN細胞完全融化。

• 使用70%酒精擦拭凍存管的外部，確保無菌操作。

• 打開凍存管，將RLE6TN細胞懸液轉移至離心管中，緩慢加入4-6 mL完全培養(yang) 基，以減少滲透壓對RLE6TN細胞的影響。

• 以1000 RPM離心3-5分鍾，去除上清液以去除冷凍保護劑。

• 使用新鮮的完全培養(yang) 基重懸RLE6TN細胞，並將其移入培養(yang) 瓶中，加入6-8 mL培養(yang) 基。

• 將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中過夜，使RLE6TN細胞逐漸恢複貼壁生長。

觀察RLE6TN細胞的生長狀態

• 第二天，顯微鏡下觀察RLE6TN細胞的生長密度和貼壁情況。確保RLE6TN細胞形態正常，表麵光滑，無細胞碎片或變形。若觀察到細胞活躍，說明複蘇操作成功。

RLE6TN細胞的傳代步驟

• 當RLE6TN細胞密度達到70%-80%時，可進行傳(chuan) 代。常規比例為(wei) 1:2或1:3。

• 按以下步驟進行RLE6TN細胞傳(chuan) 代：

• 洗滌：用PBS輕柔清洗RLE6TN細胞培養(yang) 瓶，以去除殘留培養(yang) 基。

• 消化：加入0.25%胰酶，置於(yu) 37℃消化2-5分鍾，待RLE6TN細胞呈圓形脫離培養(yang) 瓶表麵。

• 終止消化：加入完全培養(yang) 基中和胰酶，以防止過度消化。

• 離心與(yu) 重懸：轉移RLE6TN細胞懸液至離心管，1000 RPM離心3-5分鍾，去除上清。

• 接種：用新鮮培養(yang) 基重懸RLE6TN細胞，並按照適宜比例接種至新的培養(yang) 瓶中。

• 培養(yang) 基更換頻率：每周2-3次，以維持RLE6TN細胞的營養(yang) 和生長條件。

注意事項

• 無菌操作：確保所有操作步驟在無菌條件下進行，以防止RLE6TN細胞的汙染。

• 細胞狀態檢查：使用顯微鏡定期檢查RLE6TN細胞的形態和生長狀態，確保無細胞碎片和變形。

• 細胞運輸管理：在細胞運輸過程中，注意RLE6TN細胞的溫度控製，以避免溫度變化對其活性的影響。