SNU-449細胞（人肝癌細胞）

SNU-449人肝癌細胞係是由J.-G. Park及其同事於(yu) 1990年從(cong) 一名52歲韓國男性的原發性肝細胞癌組織中分離建立。在細胞分離之前，患者未接受過任何化療。該腫瘤為(wei) 單發結節，並伴有向結節周圍的擴展，組織學上以致密型和小梁型為(wei) 主。
SNU-449細胞係為(wei) 非整倍體(ti) ，模態數為(wei) 57。由於(yu) SNU-449細胞來源於(yu) 原發性肝細胞癌，並攜帶HBV DNA序列，已被廣泛應用於(yu) 肝癌的相關(guan) 研究中，成為(wei) 探索肝癌發病機製的重要細胞模型。

SNU-449細胞特性特征

• 病毒檢測：通過Southern blot雜交檢測到乙型肝炎病毒（HBV）DNA，但未檢測到HBV基因組RNA，對HBV DNA序列呈陽性。

• SNU-449細胞係對乙型肝炎病毒DNA序列的存在呈陽性。

• SNU-449細胞最初在添加了5%熱滅活胎牛血清的ACL-4培養(yang) 基中培養(yang) 。建立後，將培養(yang) 細胞保存在補充有10%熱滅活胎牛血清的RPMI 1640培養(yang) 基中。

• 腫瘤特征：原發腫瘤為(wei) 單發結節，伴有結節周圍的延伸。組織學上主要表現為(wei) 致密型和小梁型結構。

• 細胞核特征：培養(yang) 的SNU-449細胞中可見單核或雙核

SNU-449細胞參數表

SNU-449人肝癌細胞培養教程

細胞複蘇

• 水浴鍋：預熱至37℃。
  

• 培養(yang) 基準備：使用RPMI 1640培養(yang) 基，補充10%熱滅活胎牛血清（FBS），並提前預熱至37℃，以適應SNU449細胞的培養(yang) 需求。

• 將凍存的SNU449細胞管從(cong) 液氮中取出，迅速放入37℃的水浴鍋中，輕輕搖動直至細胞完全解凍（約1-2分鍾）。
  

• 解凍後，迅速將SNU449細胞懸液轉移至含4 mL預熱培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻。

• 以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清。
  

• 加入1-2 mL新鮮培養(yang) 基重懸SNU449細胞，並輕輕吹打混勻。

• 將重懸後的SNU449細胞轉移至T25培養(yang) 瓶或10 cm培養(yang) 皿中，加入約8 mL培養(yang) 基。
  

• 置於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) ，通常過夜後第二天更換培養(yang) 基，觀察SNU449細胞的密度及生長狀態。

SNU449細胞傳代

• 當SNU449細胞生長密度達到80%-90%時，應進行傳(chuan) 代。
  

• 棄去舊的培養(yang) 基，用無鈣、鎂的PBS潤洗SNU449細胞1-2次，以去除殘餘(yu) 的血清和廢物。

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液，37℃下消化1-2分鍾。
  

• 觀察顯微鏡下，當SNU449細胞呈圓形並部分脫落時，迅速將消化液棄去，加入新鮮培養(yang) 基終止消化。

• 將SNU449細胞懸液以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清。
  

• 重懸於(yu) 1-2 mL新鮮培養(yang) 基中，吹打混勻後按1:2的比例進行傳(chuan) 代，將SNU449細胞接種至新的培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，並加入足夠的培養(yang) 基（通常8 mL）。

SNU449細胞凍存

• 在SNU449細胞生長狀況良好時進行凍存操作。棄去培養(yang) 基，用PBS清洗SNU449細胞1次。
  

• 加入1 mL胰蛋白酶消化SNU449細胞，待細胞脫落後，加入培養(yang) 基終止消化。

• 將SNU449細胞以1000 RPM離心4分鍾，棄去上清。
  

• 根據細胞數量重懸於(yu) 含10% DMSO和90% FBS的凍存液中，確保SNU449細胞濃度為(wei) 1×10^6細胞/mL。

• 每個(ge) 凍存管中加入1 mL SNU449細胞懸液，標記好細胞信息。
  

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放置於(yu) -80℃冰箱中冷凍24小時後轉移至液氮罐中長期保存。