細胞培養(yang) 
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貨號：STM-CL-5232 規格：1×10⁶cells/T25培養(yang) 瓶或1mL凍存管
MKN-45細胞（人胃癌細胞）
- 來源：胃癌，肝轉移
- 細胞特征：貼壁細胞 , 圓形/上皮細胞樣
- 培養(yang) 基：生長培養(yang) 基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
- 其他：MKN-45細胞表達野生型p53蛋白、c-met原癌基因擴增、E-鈣粘蛋白(E-cadherin)啟動子存在突變
MKN-45細胞係由Hojo H於(yu) 1976年建立，源自日本一名62歲患有低分化胃腺癌女性患者的肝轉移灶。該細胞係曾感染支原體(ti) ，並通過MC-210處理成功消除。
MKN-45細胞在掃描電鏡下顯示為(wei) 相當扁平的形態，細胞表麵覆蓋有大量微絨毛，細胞邊緣存在長線狀的細胞質突起，相鄰細胞通過橋粒相連接。在光學顯微鏡下，MKN-45細胞呈圓形，表現為(wei) 半貼壁半懸浮生長，有時會(hui) 鬆散堆積。細胞排列不規則，生長中的細胞邊緣不太清晰。
MKN-45細胞特性、基因表達等
分子特征:表達野生型p53蛋白、c-met原癌基因擴增、E-鈣粘蛋白(E-cadherin)啟動子存在突變
基因特征:p16CDKN2A/MTS1/INK4A基因純合缺失、p15INK4B/MTS2基因純合缺失
MKN-45細胞表現出正常及化生的胃粘膜表型、保持一定的分化能力
染色體(ti) 數目為(wei) 67~71
MKN-45細胞掃描電鏡顯示細胞表麵有大量微絨毛、細胞邊緣有長線狀的細胞質突起、相鄰細胞通過橋粒連接
MKN-45細胞為(wei) 半貼壁半懸浮生長、生長過程中容易成團
MKN-45細胞適用於(yu) 裸鼠荷瘤實驗,可形成侵襲性生長的皮下腫瘤
MKN-45細胞參數表
| 細胞名稱 | MKN-45細胞（人胃癌細胞） |
| 簡稱 | Human gastric cancer cell line ； MKN-45 |
| 組織來源 | 胃；腺癌細胞；低分化胃腺癌肝轉移灶 |
| 建立信息 | 1976年由Hojo H建立，非ATCC細胞係 |
| 患者信息 | 62歲日本女性 |
| 細胞形態 | 圓形，上皮細胞樣 / 細胞大小約15-20μm / 核質比約1:2 |
| 生長特性 | 半貼壁半懸浮 |
| 細胞表麵/連接 | 大量微絨毛，長線狀細胞質突起 / 相鄰細胞通過橋粒連接 |
| 染色體數目/倍性 | 67~71 / 非整倍體 |
| 基因狀態 | p53野生型，p16和p15缺失，c-met擴增，E-cadherin啟動子突變 |
| 微衛星不穩定性 | MSI-L（低度微衛星不穩定） |
| 培養基 | RPMI-1640 / 10% FBS / 1% P/S |
| 培養環境 | 37°C，5% CO2，95%濕度，pH 7.2-7.4 |
| 傳代/換液 | 比例1:3-1:4 / 2-3次/周 |
| 消化方法 | 0.25% 胰蛋白酶-EDTA，2-3分鍾 |
| 倍增時間 | 約30-60小時 |
| 培養容器 | T25, T75, 6孔板, 96孔板等 |
| 凍存液/溫度 | 55%基礎培養基+40%FBS+5%DMSO / -196°C |
| 複蘇方法 | 37°C水浴，快速解凍 |
| 鑒定/檢測 | STR已通過，支原體/細菌/真菌/HIV-1/HBV/HCV陰性 |
| 體外實驗 | 藥物篩選，信號通路研究，基因功能研究，3D培養 |
| 體內實驗 | 裸鼠荷瘤模型，可形成侵襲性生長的皮下腫瘤 |
| 上皮標記 | E-cadherin, EpCAM, CK8, CK18 |
| 胃癌標記 | CEA, CA19-9, MUC1 |
| 其他標記 | c-Met (高表達), VEGF, HER2 (低表達) |
| 藥物敏感性 | 5-FU和順鉑中度敏感，紫杉醇低敏，多西他賽中敏 |
| 主要通路狀態 | PI3K/AKT活化，MAPK部分活化，Wnt/β-catenin正常 |
| 代謝特征 | 葡萄糖消耗高；乳酸產生高；穀氨酰胺依賴性中； |
| 侵襲轉移能力 | 體外遷移中等，侵襲強 ； 體內裸鼠肺轉移能力中等 |
| 表麵標記 | CD44陽性，CD133部分陽性 |
| 成球能力 | 成球能力中等 |
| γ射線敏感性 | 中度敏感 (D0: 約2Gy) |
| 培養注意點 | 易成團，消化需控製，用預處理培養皿，80-90%匯合度傳代 |
| 血清批次效應 | 可能敏感，建議批次驗證 |
| 安全等級 | BSL-2 |
| 專利狀態 | 無相關專利限製 |
| 原始文獻 | Hojo H. (1977). Niigata Igakkai Zasshi. 91:737-763. |
培養教程
MKN-45人胃癌細胞培養教程
細胞複蘇
從(cong) 液氮中快速取出凍存管，迅速放入37°C水浴中解凍。解凍後，將細胞懸液轉移到預熱的RPMI-1640培養(yang) 基中。通過輕柔離心去除上清，用新鮮培養(yang) 基重新懸浮細胞，並將其轉移至培養(yang) 瓶或培養(yang) 皿中，放入預調好的培養(yang) 箱中培養(yang) 。
日常培養與傳代
每2-3天更換一次培養(yang) 基，觀察細胞生長情況。當細胞密度達到80%-90%時，使用PBS輕輕衝(chong) 洗細胞，加入適量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液進行消化。觀察細胞在顯微鏡下變圓並開始脫落時，加入含血清的完全培養(yang) 基終止消化。通過輕柔吹打使細胞充分脫落並分散，將其按照1:2或1:3的比例接種到新的培養(yang) 瓶中。
特別注意事項與常見問題解決
生長特性： MKN-45細胞呈半貼壁半懸浮生長，易於(yu) 形成細胞團簇，需要在傳(chuan) 代過程中特別注意分散細胞。
消化時間控製： 消化時間通常控製在3-5分鍾，以避免過度消化或不充分消化的問題。
輕柔操作： 操作過程中要輕柔，特別是在吹打過程中，避免過度吹打導致細胞碎片產(chan) 生。
培養(yang) 環境維護： 定期檢查並校準培養(yang) 箱的溫度、CO2濃度和濕度，保持細胞的穩定生長環境。
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STR鑒定及相關
| Amelogenin | X |
| CSF1PO | 12 |
| D2S1338 | 18 |
| D3S1358 | 15,16 |
| D5S818 | 10,11 |
| D6S1043 | 14 |
| D7S820 | 10,11 |
| D8S1179 | 13,17 |
| D12S391 | 26 |
| D13S317 | 8,11 |
| D16S539 | 10 |
| D18S51 | 16 |
| D19S433 | 14,16.2 (CCRID=1101HUM-PUMC000229; CLS=300489) |
| 14,17 (DSMZ=ACC-409) | |
| D21S11 | 31 |
| FGA | 19 (KCLB=80103) |
| 19,24 (CCRID=1101HUM-PUMC000229; CLS=300489; DSMZ=ACC-409; PubMed=25877200) | |
| Penta D | 10 |
| Penta E | 10 |
| TH01 | 7 |
| TPOX | 8 |
| vWA | 19 |
參考文獻
- PMID: 18399796 DOI: 10.1042/BJ20071562
- 摘要：... free N-glycans were accumulated in the st...
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