KB細胞（人口腔表皮樣癌細胞）

KB細胞（人口腔表皮樣癌細胞係）是一種具有上皮樣形態的細胞，最初於(yu) 1955年由哈裏·伊格爾（Harry Eagle）從(cong) 一位30歲男性口腔鱗狀細胞癌患者的腫瘤組織中分離。盡管KB細胞最初被認為(wei) 是口腔癌細胞，後續通過同工酶分析、HeLa染色體(ti) 標記和DNA指紋圖譜分析發現，KB細胞實際上是受HeLa細胞汙染的衍生物。盡管其被確認受到HeLa細胞汙染，KB細胞仍然因其獨特的特性廣泛應用於(yu) 口腔癌研究，特別是在免疫組織化學和藥物敏感性研究中，繼續作為(wei) 上皮細胞和腫瘤研究的重要實驗模型。

KB細胞表現出上皮樣貼壁生長特性，在免疫過氧化物酶染色中角蛋白呈陽性。

KB細胞特性特征

• 基因表達：KB細胞表達角蛋白，這是一種上皮細胞特有的結構蛋白，通常用於(yu) 鑒定上皮來源的細胞。

• 同工酶分析：KB細胞顯示出G6PD（葡萄糖-6-磷酸脫氫酶）和A同工酶的活性，這些同工酶在細胞代謝和抗氧化反應中起重要作用。

• DNA指紋圖譜：在STR（短串聯重複序列）分析中，KB細胞表現出特定的DNA型譜，包括不同的基因座位，如D5S818、D13S317等，這些特征可用於(yu) 鑒定和確認其身份。
  

• 汙染曆史：KB細胞係被發現是通過HeLa細胞汙染建立的，導致其DNA特征與(yu) HeLa細胞相似。

• 人乳頭瘤病毒（HPV）：KB細胞中含有人乳頭瘤病毒18型（HPV-18）的序列，這一發現進一步支持了其與(yu) 腫瘤相關(guan) 的特性，並表明其可能在腫瘤發生中發揮作用
  

KB細胞參數表

KB人口腔表皮樣癌細胞培養教程

KB細胞細胞複蘇與初代培養

• 將凍存的KB細胞從(cong) 液氮罐中取出，迅速放入37℃水浴中，並輕輕搖動凍存管使KB細胞均勻融化（約需1分鍾）。避免KB細胞長時間在水浴中停留，以防KB細胞活力受損。

• 在超淨工作台中，緩慢將融化的KB細胞懸液轉移至15ml離心管，加入10ml已預溫至37℃的完全培養(yang) 基（90% MEM + 10% FBS），1000rpm離心5分鍾，棄去上清。

• 用2ml完全培養(yang) 基輕輕重懸KB細胞沉澱，將懸浮的KB細胞接種於(yu) 一個(ge) 預先塗有膠原的T25培養(yang) 瓶中。加入培養(yang) 基至5ml，輕輕搖勻。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中培養(yang) 。24小時後更換培養(yang) 基以去除未貼壁的浮遊KB細胞，確保貼壁的KB細胞繼續生長。

KB細胞傳代培養

• 當KB細胞生長至80-90%匯合度時，吸去舊培養(yang) 基，用PBS輕輕洗滌KB細胞一次以去除殘留的培養(yang) 基。

• 加入1ml 0.25%的胰酶溶液，置於(yu) 37℃下消化1-2分鍾，直至KB細胞出現皺縮、圓化並輕鬆脫落。

• 加入1ml完全培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打，使KB細胞充分分散成單細胞懸液。

• 將KB細胞懸液轉移至15ml離心管，1000rpm離心5分鍾，棄去上清。隨後用完全培養(yang) 基重懸KB細胞。

• 根據需要以1:2至1:4的比例將KB細胞重新接種至新的T25培養(yang) 瓶中，每瓶加入5ml完全培養(yang) 基。置於(yu) 37℃、5% CO₂培養(yang) 箱中繼續培養(yang) ，確保KB細胞良好生長。

• 每2-3天更換培養(yang) 基一次，及時觀察KB細胞形態和匯合度，確保KB細胞處於(yu) 健康狀態。

KB細胞凍存

• 收集對數期KB細胞：在KB細胞生長至對數生長期時，進行消化並收集KB細胞。用PBS清洗一次，去除培養(yang) 基中的殘留物。

• 製備KB細胞凍存液：用預冷的凍存液（90% FBS + 10% DMSO）以1×10⁶ KB細胞/ml的密度重懸細胞。

• KB細胞凍存操作：將重懸後的KB細胞分裝入凍存管中，每管1ml。隨後，放入-80℃程序降溫盒中過夜進行緩慢冷凍。

• KB細胞長期保存：次日將KB細胞凍存管轉移至液氮罐中，進行長期保存，避免溫度波動對KB細胞活性的影響。