
HPTF-SV40細胞係是一種通過慢病毒介導的SV40大T抗原轉染獲得的永生化人胰腺腫瘤成纖維細胞係。HPTF細胞係來源於(yu) 手術切除的人類胰腺癌組織,通過SV40大T抗原的引入,使得這些細胞在體(ti) 外能夠長期培養(yang) ,並且具備強大的增殖能力,至少可以穩定傳(chuan) 代20代以上。HPTF-SV40細胞係特別適用於(yu) 研究胰腺癌的生物學特性,腫瘤微環境分析以及藥物篩選等科學研究領域。
HPTF細胞SV40永生化參數表
細胞名稱 | HPTF細胞(人胰腺腫瘤成纖維細胞SV40永生化) |
細胞別稱 | HPTF(SV40);人胰腺癌關聯成纖維細胞永生化細胞係 |
來源 | 人類胰腺癌手術切除組織 |
永生化方法 | 慢病毒轉染SV40大T抗原 |
細胞類型 | 永生化成纖維細胞 |
細胞形態 | 長梭形,貼壁生長 |
傳代能力 | 至少穩定傳代20代以上 |
生長特性 | 迅速增殖,適合低血清條件 |
培養基 | 成纖維細胞培養基 |
培養條件 | 37℃,5% CO₂,濕度70%-80% |
換液周期 | 每2-3天 |
培養基體積 | T25瓶:10-12 mL;10 cm皿:12-15 mL |
傳代比例 | 1:2-1:4(視細胞生長速度及密度而定) |
凍存條件 | 凍存液:55%基礎培養基+40% FBS+5% DMSO 溫度:液氮 |
凍存規格 | 200-300萬細胞/mL,1 mL每管 |
染色體核型 | 與kaiyun网站安全一致,46, XY, t(8;19)(q24.3;q13.1) |
應用領域 | 胰腺癌生物學特性研究、腫瘤微環境相互作用、藥物篩選等 |
注意事項 | 避免長時間常溫保存,謹慎操作以防汙染 |
培養教程
HPTF人胰腺腫瘤成纖維細胞SV40永生化培養教程
HPTF細胞複蘇
從(cong) 液氮中取出凍存管,並迅速放入37℃水浴中解凍,解凍時輕輕搖動凍存管以加速過程。
解凍後,立即將HPTF細胞懸液轉移到含有4-6 mL預溫完全培養(yang) 基的離心管中,充分混合。
以1000 RPM離心3-5分鍾,棄去上清液。
用新鮮的完全培養(yang) 基重懸HPTF細胞,並輕輕混勻。
將重懸後的HPTF細胞懸液接種到T25培養(yang) 瓶中,根據瓶型添加10-12 mL的培養(yang) 基。
將培養(yang) 瓶置於(yu) 37℃、5% CO₂、濕度70%-80%的培養(yang) 箱中培養(yang) 。
HPTF細胞傳代
觀察HPTF細胞的融合度,當融合度達到70%-80%時,準備進行傳(chuan) 代。
預先準備好新的培養(yang) 瓶和新鮮的培養(yang) 基。
吸去舊的培養(yang) 基。
用3-4 mL室溫PBS輕輕衝(chong) 洗HPTF細胞,以去除殘留培養(yang) 基。
加入1 mL胰蛋白酶,輕輕搖晃培養(yang) 瓶使胰酶均勻覆蓋HPTF細胞。
將培養(yang) 瓶放入37℃培養(yang) 箱中消化,觀察HPTF細胞的變化。當細胞開始脫落時,立即終止消化。
加入2-3 mL完全培養(yang) 基終止胰酶作用,混勻後在1000 RPM下離心3-5分鍾,棄去上清液。
使用新鮮培養(yang) 基重懸HPTF細胞,並根據需要將其均勻分配至新的培養(yang) 瓶中。
根據HPTF細胞的生長速度和密度,通常采用1:2至1:4的傳(chuan) 代比例。
HPTF細胞凍存
消化並離心後,將HPTF細胞沉澱重懸於(yu) 凍存液中。
將細胞懸液分裝至標記好的凍存管中。
將凍存管放入程序降溫盒中,逐步降溫至-80℃,隨後轉移至液氮罐中長期保存。
注意事項
培養(yang) 基應避免長時間暴露在常溫環境,以防止HPTF細胞的汙染。
胰蛋白酶處理時間應控製得當,避免過度消化導致HPTF細胞損傷(shang) 。
在HPTF細胞運輸過程中,應避免劇烈振動,確保細胞的完整性。
定期檢查HPTF細胞的生長狀態,確保無汙染,並觀察細胞形態和增殖情況。