hTERT-HPNE細胞（人胰腺導管上皮細胞）

hTERT-HPNE細胞是一種人胰腺導管上皮細胞係，起源於(yu) 一名52歲男性患者的胰腺組織。通過使用含有hTERT基因的逆轉錄病毒表達載體(ti) （pBABEpuro），這些細胞被成功轉染，獲得了永生化特性。hTERT基因的引入使細胞端粒酶活性增加（呈陽性），從(cong) 而避免了細胞衰老，即使經過超過150次的細胞倍增，這些細胞仍保持旺盛的增殖能力。
hTERT-HPNE細胞適用於(yu) 3D細胞培養(yang) 、藥物開發及高通量篩選實驗，提供了一個(ge) 研究胰腺導管細胞生物學及相關(guan) 疾病的有力工具。

hTERT-HPNE細胞特性特征

• htert-hpne細胞在特定條件下可誘導分化為(wei) 胰腺導管樣細胞

• 通過逆轉錄病毒表達載體(ti) （pBABEpuro）轉導人胰管細胞，表達hTERT基因
  

• htert-hpne細胞中可檢測到Nestin、p-glycoprotein和碳酸酐酶II等胰腺導管細胞的標記物

• 增殖能力：細胞在經過超過150次的倍增後仍保持旺盛的增殖能力，未表現出衰老現象。

• 分子特征：細胞內(nei) 端粒酶活性呈陽性，表明其具有不衰老特性。

• 表型特征：hTERT-HPNE細胞展現出腺泡到導管轉化的中間表型，未分化狀態下表達巢蛋白，並顯示Notch信號通路的活性。

• 誘導分化能力：在丁酸鈉和5-氮-2'-脫氧胞苷的誘導下，hTERT-HPNE細胞能夠形成胰腺導管細胞，其特征包括多藥耐藥蛋白（MDR-1）、碳酸酐酶II及細胞角蛋白7、8、19的表達。

hTERT-HPNE細胞參數表

hTERT-HPNE人胰腺導管上皮細胞培養教程

hTERT細胞複蘇與初代培養

• 從(cong) 液氮罐中取出凍存的hTERT細胞，將其迅速置於(yu) 37°C的水浴中。輕輕搖動凍存管，直到hTERT細胞完全融化。為(wei) 防止hTERT細胞因溫度變化過大而受損，融化過程應盡可能快速完成。

• 將融化後的hTERT細胞懸液小心轉移至15 mL離心管中。緩慢加入5 mL預熱的完全培養(yang) 基（DMEM高糖培養(yang) 基，含10%胎牛血清（FBS）和1%青黴素-鏈黴素（P/S））。隨後，1200 rpm離心3分鍾，棄去上清，用5 mL預熱的完全培養(yang) 基重懸hTERT細胞。

• 將重懸後的hTERT細胞接種到一個(ge) T25培養(yang) 瓶中，並加入足量的完全培養(yang) 基（總體(ti) 積控製在10-12 mL）。將hTERT細胞培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO2的培養(yang) 箱中進行培養(yang) 。

hTERT細胞常規培養與傳代

• 每2-3天更換一次新鮮的完全培養(yang) 基。更換時應根據hTERT細胞的生長狀態及培養(yang) 基顏色的變化來判斷是否需要更換。

• 當hTERT細胞在培養(yang) 瓶內(nei) 貼壁生長並達到80%-90%的匯合度時，需進行傳(chuan) 代。常見的傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2至1:4。

• 預熱0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液至37°C。倒掉培養(yang) 瓶內(nei) 的舊培養(yang) 基，加入3-5 mL PBS輕輕洗滌hTERT細胞表麵，然後棄去PBS。
  

• 向培養(yang) 瓶中加入1-2 mL預熱的胰酶，置於(yu) 37°C孵育消化。消化過程中，建議首次使用顯微鏡觀察，以判斷最佳消化時間——通常當hTERT細胞形態變圓且輕拍瓶壁時可見細胞開始脫落時，即為(wei) 合適的消化時間。

• 一旦消化完成，立即加入3 mL完全培養(yang) 基以終止消化反應。使用移液槍輕輕吹打瓶壁，以確保hTERT細胞完全從(cong) 瓶壁脫落。

• 收集hTERT細胞懸液並以1200 rpm離心3分鍾，棄去上清。用適量完全培養(yang) 基重懸hTERT細胞，並按適當的傳(chuan) 代比例接種到新培養(yang) 瓶中。

• 將接種好的hTERT細胞培養(yang) 瓶重新放置於(yu) 37°C、5% CO2的培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

hTERT細胞培養注意事項

• hTERT細胞複蘇後，建議盡快更換新鮮的培養(yang) 基，以確保hTERT細胞有充足的營養(yang) 和最佳的生長環境。

• 若發現培養(yang) 瓶有破裂或培養(yang) 液有漏液，需立即檢查hTERT細胞是否受到汙染。如確認為(wei) 汙染，需采取適當措施處理受汙染的hTERT細胞和培養(yang) 器皿。

• 若發現hTERT細胞懸浮於(yu) 培養(yang) 基中而未能貼壁，可將培養(yang) 瓶平放在培養(yang) 箱中1-2小時以觀察hTERT細胞貼壁情況。如果大部分hTERT細胞重新貼壁，則可以繼續培養(yang) 並更換培養(yang) 基。若hTERT細胞仍不貼壁，可將其離心收集並轉移至新培養(yang) 瓶中，同時在原培養(yang) 瓶中保留部分培養(yang) 液繼續培養(yang) ，直至hTERT細胞穩定貼壁。