PL45細胞（人胰腺導管腺癌細胞） （暫不提供）

PL45細胞係是一種胰腺癌上皮細胞係，於(yu) 1992年從(cong) 一名男性胰腺導管癌患者的原發腫瘤中分離獲得。患者被確診為(wei) 低分化胰腺導管腺癌。PL45細胞係與(yu) Panc 10.05細胞係來源相同，均來自該患者的胰腺組織，因而它們(men) 在遺傳(chuan) 特性和生物學行為(wei) 上具有高度相似性。
PL45細胞在K-ras基因的第12密碼子處發生了突變，GGT->GAT的突變導致天冬氨酸替代了甘氨酸。這種K-ras突變與(yu) Panc 10.05細胞係完全相同。細胞係中的DPC4和BRCA2基因保持野生型，未發生突變。
PL45細胞呈上皮樣，主要以貼壁方式生長，且具有快速的增殖能力。在胰腺癌機製的研究中得到了廣泛應用。

PL45細胞特性特征

• 基因突變：K-Ras基因：在密碼子12處表現出GGT->GAT突變，導致天冬氨酸替代甘氨酸（K-Ras+）；p53基因：在密碼子255處有ATC->AAC突變，導致天冬酰胺替代異亮氨酸（p53+）。

• 基因表達：BRCA2基因：表達正常（BRCA2+）；DPC4基因：表達正常（DPC4+）；p16基因：具有野生型，但在PL45細胞中轉錄沉默並甲基化。

• PL45細胞係中包含以下癌症相關(guan) 基因：BRCA2+、DPC4+、K-Ras+、p53+

• PL45細胞具有野生型細胞周期蛋白依賴性激酶（CDK4）基因。

PL45細胞參數表

PL45人胰腺導管腺癌細胞培養教程

PL45細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮罐中取出PL45細胞凍存管，迅速放入37℃水浴中，保持輕微搖晃，確保在30-60秒內(nei) 完全解凍。

• 用75%酒精消毒PL45細胞凍存管外表麵，確保無汙染後打開管蓋，將PL45細胞懸液轉移至無菌離心管中。

• 向離心管中緩慢加入4-6 mL預熱的完全培養(yang) 基，輕輕混勻PL45細胞懸液。

• 以1000 RPM離心5分鍾，棄去上清液，保留沉澱的PL45細胞。

• 重新懸浮PL45細胞於(yu) 1-2 mL新鮮培養(yang) 基中，將其轉移至預先準備好的培養(yang) 瓶中，並置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中過夜。

• 次日更換新鮮培養(yang) 基，清除複蘇過程中的代謝廢物，並監測PL45細胞的貼壁及生長情況。

PL45細胞傳代操作

• 當PL45細胞密度達到80%-90%時需進行傳(chuan) 代操作。

• 首先棄去培養(yang) 瓶中的舊培養(yang) 基，並使用不含鈣鎂的PBS衝(chong) 洗PL45細胞1-2次，以去除殘留的血清成分。

• 加入1-2 mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含0.53 mM EDTA），並在37℃下消化1-2分鍾，期間通過顯微鏡觀察PL45細胞的消化進程。

• 當大部分PL45細胞開始圓化並脫落時，立即加入3-4 mL含10% FBS的完全培養(yang) 基中止消化反應。

• 將混合液吸入離心管中，1000 RPM離心5分鍾，棄去上清液。

• 重新將PL45細胞懸浮於(yu) 1-2 mL新鮮培養(yang) 基中，並按1:2至1:6的比例分配到新的培養(yang) 瓶中，加入6-8 mL完全培養(yang) 基，置於(yu) 37℃培養(yang) 箱中繼續培養(yang) 。

PL45細胞凍存步驟

• 在PL45細胞生長至對數生長期並狀態良好時進行凍存操作。

• 在凍存前一天更換培養(yang) 基，確保PL45細胞處於(yu) 最佳生長狀態。

• 傳(chuan) 代後，用PBS衝(chong) 洗PL45細胞，並使用胰蛋白酶消化細胞。細胞脫落後，加入完全培養(yang) 基中止消化。

• 以1000 RPM離心5分鍾，棄去上清，將PL45細胞重懸於(yu) 適量的凍存液中，確保最終濃度為(wei) 10% DMSO和1x10^6 cells/mL。

• 將PL45細胞懸液分裝至凍存管中，標記清楚相關(guan) 信息。

• 將凍存管置於(yu) 程序化降溫盒中，以每分鍾1℃的降溫速率降溫至-80℃，然後轉移至液氮罐中長期保存。