8305C細胞（人甲狀腺癌細胞係）

8305C是一種人甲狀腺未分化癌細胞（anaplastic thyroid carcinoma, ATC），從(cong) 一名67歲女性患者的未分化甲狀腺癌原發腫瘤中分離出來。該癌組織含有殘留的高分化成分，提示高分化到未分化的癌進展。

8305C細胞攜帶p53基因突變。序列分析證實，對腫瘤抑製基因p53、Rb、APC和MCC進行了分析，序列分析證實了p53基因密碼子273的第一個(ge) 堿基處的C:G到T:a轉變。沒有觀察到腫瘤抑製基因雜合性的喪(sang) 失。

8305C細胞係表現出未分化甲狀腺癌的特征，包括梭形、多邊形和巨細胞，並在培養(yang) 過程中表現出貼壁生長，形成大的紡錘形單層。細胞倍增時間約為(wei) 43小時。可用於(yu) 甲狀腺癌症研究。

8305C細胞特性

• 細胞來源：67歲女性患者的未分化甲狀腺癌。

• 細胞類型：人甲狀腺未分化癌細胞（anaplastic thyroid carcinoma, ATC）。

• 組織特點：含有殘留的高分化成分，提示從(cong) 高分化到未分化的癌進展。

• 分子特征：攜帶p53基因突變，密碼子273的第一個(ge) 堿基處的C到T轉變；未觀察到腫瘤抑製基因（p53、Rb、APC和MCC）雜合性喪(sang) 失。

• 細胞形態：梭形、多邊形和巨細胞，上皮細胞樣。

• 生長特性：貼壁生長，大的紡錘形單層。

• 倍增時間：約43小時。

8305C細胞參數表

8305C人甲狀腺癌細胞係培養

收到常溫8305C細胞後的處理

• 收到常溫8305C細胞後，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現象。

• 用75%酒精擦拭細胞培養(yang) 瓶表麵，顯微鏡下觀察8305C細胞狀態。先不要打開培養(yang) 瓶蓋，將8305C細胞置於(yu) 細胞培養(yang) 箱內(nei) 靜置培養(yang) 2-4小時，以便穩定細胞狀態。

• 仔細閱讀8305C細胞說明書(shu) ，了解細胞相關(guan) 信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細胞形態、所用基礎培養(yang) 基、血清比例、所需細胞因子、傳(chuan) 代比例、換液頻率等。

• 靜置完成後，取出細胞培養(yang) 瓶，鏡檢、拍照，記錄8305C細胞狀態（所拍照片將作為(wei) 後續服務依據）；建議8305C細胞傳(chuan) 代培養(yang) 後，定期拍照、記錄細胞生長狀態。

8305C細胞複蘇步驟

• 將含有1mL 8305C細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yang) 基混合均勻。

• 在1000rpm條件下離心4分鍾，棄去上清液，補加1-2mL培養(yang) 基後吹勻。

• 將所有8305C細胞懸液加入培養(yang) 瓶中培養(yang) 過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yang) 基，培養(yang) 過夜）。

• 第二天換液並檢查8305C細胞密度。

8305C細胞傳代步驟

• 吸出原培養(yang) 液。

• 加入2ml左右PBS，輕輕晃動培養(yang) 瓶潤洗8305C細胞，吸出PBS丟(diu) 棄。

• 加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），輕輕晃動培養(yang) 瓶使之浸潤所有細胞。

• 放入培養(yang) 箱消化，顯微鏡下看到8305C細胞塊中間的細胞明顯變圓有間隙時可終止，全程不要拍打培養(yang) 瓶。消化時間約為(wei) 1~2分鍾。

• 加入3ml含血清的培養(yang) 基終止消化，吹打8305C細胞使之脫壁並在液體(ti) 裏反複吹打使細胞盡量呈單顆細胞的懸浮液。

• 收集細胞懸液離心，1200rpm/min 3分鍾，離心完吸出上清丟(diu) 棄。

• 加入新鮮培養(yang) 基，吹打幾下混勻8305C細胞即可，按比例（1:3-1:6）接種到新培養(yang) 瓶，補足培養(yang) 基，擰鬆瓶蓋或使用透氣瓶蓋進行培養(yang) 。

8305C細胞凍存步驟

• 待8305C細胞生長狀態良好時，棄去培養(yang) 基後，PBS清洗瓶底1-2次後加入1ml胰酶，細胞變圓脫落後，加入2ml完全培養(yang) 基終止消化，可使用血球計數板計數。

• 1000rpm離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為(wei) 10%。加入DMSO後迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。

• 將凍存管置於(yu) 程序降溫盒中，放入-80℃冰箱，至少2小時後轉入液氮罐儲(chu) 存。記錄凍存管位置以便下次拿取。