WI-38細胞係（人胚肺細胞）

WI-38人胚肺細胞係是第一個(ge) 用於(yu) 人類疫苗製備的人類二倍體(ti) 細胞係，由美國生物學家Leonard Hayflick於(yu) 1960年建立。WI-38細胞是從(cong) 一個(ge) 人工流產(chan) 的14周雌性胎兒(er) 的肺組織中分離。

WI-38細胞是體(ti) 外培養(yang) 的人胚肺成纖維細胞，屬於(yu) 有限細胞係，與(yu) 通常為(wei) 非整倍體(ti) 的永生化細胞係不同，WI-38細胞在體(ti) 外培養(yang) 時能夠維持二倍體(ti) 狀態，各方麵特性與(yu) 正常細胞相似。

WI-38細胞係在冷凍過程中曾發現第8通道安瓿含有微球菌汙染，但通過在抗生素存在下的多次傳(chuan) 代處理後得到清除。

為(wei) 了增強細胞的生長，可以在培養(yang) 基中添加腫瘤壞死因子α（TNF-α）。由於(yu) 其穩定的二倍體(ti) 特性和對病毒的敏感性，WI-38細胞是研究病毒感染機製和開發疫苗的理想模型。

WI-38細胞係特征特性

• wi-38細胞是有限細胞係,壽命約為(wei) 50±10代、可通過添加TNF-α促進生長

• wi-38細胞表達G6PD B型同工酶

• 分子特征:逆轉錄酶表達陰性

• 病毒敏感性:易感水皰性口炎病毒、單純皰疹病毒、偽(wei) 狂犬病病毒、脊髓灰質炎病毒1型等

• wi-38細胞是首個(ge) 用於(yu) 人類疫苗製備的人類二倍體(ti) 細胞係、可用於(yu) 滅活病毒檢測、適合作為(wei) 轉染宿主

• wi-38細胞與(yu) 正常體(ti) 細胞性狀相近、為(wei) 終末分化細胞,不具分化潛能

WI-38細胞係參數表

WI-38人胚肺細胞係培養教程

WI-38細胞複蘇

• 從(cong) 液氮中取出凍存的WI-38細胞管，迅速放入37°C水浴中解凍。

• 解凍後立即用70%酒精消毒WI-38細胞管外表麵。

• 將WI-38細胞懸液轉移到含有10ml預熱培養(yang) 基的離心管中，1000rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，加入新鮮培養(yang) 基重懸WI-38細胞，轉移到T25培養(yang) 瓶中。

WI-38細胞培養

• 將WI-38細胞培養(yang) 瓶放入37°C、5% CO2的培養(yang) 箱中。

• 每隔2-3天更換WI-38細胞培養(yang) 基，觀察細胞生長情況。

WI-38細胞傳代

• 當WI-38細胞達到80-90%匯合時，進行傳(chuan) 代。

• 去除舊培養(yang) 基，用PBS洗滌WI-38細胞。

• 加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育3-5分鍾，觀察WI-38細胞脫落。

• 加入新鮮培養(yang) 基中和胰蛋白酶，輕輕吹打瓶壁，形成WI-38細胞懸液。

• 1000rpm離心5分鍾，棄去上清，重懸WI-38細胞。

• 按1:2比例將WI-38細胞接種到新的培養(yang) 瓶中，加入適量新鮮培養(yang) 基。

WI-38細胞計數

• 使用血細胞計數板進行WI-38細胞計數。

• 將WI-38細胞懸液吸出少許，滴加在計數板上，靜置3分鍾後鏡下觀察。

• 計算4大格WI-38細胞總數，按公式計算WI-38細胞濃度。

WI-38細胞凍存

• 當WI-38細胞狀態良好時，可進行凍存。

• 收集WI-38細胞懸液，離心後重懸於(yu) 凍存液（90%血清，10% DMSO）。

• 分裝到凍存管中，逐步降溫至-80°C，隨後轉移到液氮中長期保存。

注意事項

• 培養(yang) WI-38細胞過程中保持無菌操作，避免汙染。

• WI-38細胞傳(chuan) 代時避免過度消化，影響細胞活性。

• 定期觀察WI-38細胞形態和生長狀態，及時調整培養(yang) 條件。

常見汙染問題及預防措施

• 細菌汙染：嚴(yan) 格無菌操作，定期消毒WI-38細胞培養(yang) 室和器具。

• 真菌汙染：保持WI-38細胞培養(yang) 環境清潔，定期檢查和清理培養(yang) 箱。

• 支原體(ti) 汙染：定期檢測和使用無汙染的試劑和培養(yang) 基。

• 病毒汙染：使用無汙染的WI-38細胞係和試劑，操作時注意個(ge) 人防護。

• 交叉汙染：嚴(yan) 格分隔操作不同WI-38細胞係，避免器具混用和操作不規範。