L6565細胞（小鼠白血病克隆細胞係）

L6565細胞係源自L6565白血病小鼠的脾細胞，通過胰蛋白酶處理懸浮得到。L6565細胞是懸浮方式生長的細胞係，形態特征類似於(yu) 淋巴母細胞。

L6565細胞特性特征

• 核結構：電鏡觀察顯示，L6565細胞核邊界清晰。
  

• 細胞質：L6565細胞質中含有豐(feng) 富的細胞器和A類、C類病毒顆粒。

• 染色體(ti) 數目：染色體(ti) 數目從(cong) 38到144不等，顯示出較大的遺傳(chuan) 變異性。
  

• 基因表達：c-myc和c-fos基因在L6565細胞中過量表達。

• 病毒含量：L6565細胞克隆是一株含有RNA病毒的淋巴細胞白血病幹細胞

L6565細胞參數表

L6565小鼠白血病克隆細胞係培養教程

L6565細胞複蘇

• 將含有1 mL L6565細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速解凍，並不斷輕搖。

• 加入4 mL預熱的完全培養(yang) 基（RPMI-1640 + 10% FBS + 1% 雙抗），混合均勻。

• 在1000 RPM條件下離心4分鍾，棄去上清液。

• 補加1-2 mL完全培養(yang) 基，輕輕吹打混勻L6565細胞。

• 將L6565細胞懸液轉移到培養(yang) 瓶中，加入適量培養(yang) 基，置於(yu) 37℃、5% CO2培養(yang) 箱中過夜培養(yang) 。

• 次日換液並檢查L6565細胞密度。

L6565細胞傳代

• 當L6565細胞密度達到80%-90%時進行傳(chuan) 代。

• L6565細胞為(wei) 懸浮細胞，傳(chuan) 代比例為(wei) 1:2至1:6，每周傳(chuan) 代2次。

• 收集L6565細胞懸液，1000 RPM離心4分鍾。

• 棄去上清液，用預熱的完全培養(yang) 基重懸L6565細胞。

• 按所需比例將L6565細胞分裝到新的培養(yang) 瓶中，補加新鮮完全培養(yang) 基。

L6565細胞凍存

• 收集對數生長期的L6565細胞。

• 製備凍存液：90%完全培養(yang) 基 + 10% DMSO。

• 調整L6565細胞濃度至約5 x 10^5 cells/mL。

• 將L6565細胞懸液分裝到凍存管中，每管1 mL。

• 使用程序降溫盒或梯度降溫，最終置於(yu) 液氮中長期保存。

快速檢測L6565細胞是否被汙染

1. 顯微鏡觀察

• 將L6565細胞懸液滴在載玻片上，蓋上蓋玻片。

• 在顯微鏡下觀察L6565細胞形態和培養(yang) 基的透明度。

• 檢查是否有異常顆粒、細胞碎片或細菌、真菌等汙染物。

2. 培養基顏色變化

• 觀察培養(yang) 基顏色是否發生變化，如變黃或變渾濁。

• 顏色變化可能是細菌或真菌汙染的跡象。

3. 支原體檢測

• 使用支原體(ti) 檢測試劑盒進行檢測。

• 取少量L6565細胞培養(yang) 上清液，按照試劑盒說明進行操作。

• 通過PCR或熒光染色法檢測支原體(ti) 汙染。

4. 細菌和真菌培養

• 取少量L6565細胞培養(yang) 上清液，接種在LB瓊脂平板（細菌）和SDA瓊脂平板（真菌）上。

• 在37℃培養(yang) 24-48小時，觀察是否有菌落生長。

5. 比較對照

• 與(yu) 未汙染的L6565細胞對照，比較細胞生長狀態和形態。

如果發現L6565細胞汙染，如何處理

1. 立即隔離

• 將汙染的L6565細胞培養(yang) 瓶立即從(cong) 培養(yang) 箱中取出，避免交叉汙染其他細胞。

2. 處理汙染L6565細胞

• 將汙染的L6565細胞培養(yang) 瓶和培養(yang) 基進行高壓滅菌處理。

• 使用含有消毒劑的溶液（如70%乙醇）清潔工作台和相關(guan) 設備。

3. 重新培養L6565細胞

• 如果有備用的未汙染L6565細胞凍存管，按照細胞複蘇步驟重新培養(yang) 。

• 如果沒有備用L6565細胞，聯係供應商獲取新的細胞株。