
GT1-1細胞株(小鼠垂體(ti) 瘤細胞株)
- 來源:垂體(ti) 瘤;SV40轉化
- 細胞特征:貼壁細胞 , 上皮細胞樣
- 培養(yang) 基:DMEM/F12+5% HS+5% FBS+1%P/S
- 其他:神經內(nei) 分泌特性,能夠合成和分泌GnRH;表達多種神經遞質受體(ti) ,如GABA受體(ti) 、穀氨酸受體(ti) 等
GT1-1細胞是GT1細胞係的一個(ge) 亞(ya) 克隆,GT1來源於(yu) 穩定表達SV40大T抗原的轉基因小鼠產(chan) 生的可以分泌促性腺激素釋放激素LHRH的腫瘤。GT1-1細胞保留了GnRH神經元的許多特性,能夠合成pro-LHRHmRNA,並向培養(yang) 基中分泌LHRH免疫反應物質。
GT1-1細胞株特性特征
GT1-1細胞能夠表達pro-LHRH mRNA.
GT1-1細胞可以向培養(yang) 基中分泌具有LHRH(也稱為(wei) GnRH)免疫反應性的物質.
攜帶SV40大T抗原基因,導致了下丘腦GnRH神經元的不受控製生長,保留了原代GnRH神經元的許多基因特征.
GT1-1細胞能夠合成和分泌促性腺激素釋放激素(LHRH/GnRH).
GT1-1細胞保留了原代GnRH神經元的許多功能特征
GT1-1細胞株參數表
細胞名稱 | GT1-1細胞株(小鼠垂體瘤細胞株) |
細胞別稱 | GT1-1細胞;GT11; 小鼠垂體瘤細胞 |
種屬來源 | 小鼠 |
組織來源 | 垂體 |
生長特性 | 貼壁生長 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
生物安全等級 | 1 |
細胞規格 | 1×10^6 cells/T25培養瓶或者1mL凍存管包裝 |
支原體檢測 | 無 |
培養基 | DMEM/F12+8%胎牛血清+2%馬血清(兩種血清均需滅活,滅活方法:42度,30分鍾) |
培養條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ |
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 |
分子特征 | 表達pro-LHRH mRNA,分泌LHRH樣免疫反應性物質 |
基因特征 | 攜帶SV40大T抗原基因 |
功能特性 | 能夠合成和分泌促性腺激素釋放激素(LHRH/GnRH) |
培養教程
GT1-1小鼠垂體瘤細胞株培養教程
細胞複蘇
解凍步驟: 將含1mL GT1-1細胞懸液的凍存管在37°C水浴中迅速解凍。
重懸: 加入4mL預熱的完全培養(yang) 基,輕輕混合均勻。
離心: 以1000 RPM離心4分鍾,棄去上清液。
重懸: 用1-2mL新鮮培養(yang) 基重懸GT1-1細胞。
培養(yang) : 將細胞懸液轉移至培養(yang) 瓶中,添加適量培養(yang) 基,並放置於(yu) 37°C、5% CO2的培養(yang) 箱中培養(yang) 過夜。
換液: 次日更換培養(yang) 基並檢查GT1-1細胞的密度。
細胞傳代
傳(chuan) 代時機: 當GT1-1細胞密度達到80-90%時進行傳(chuan) 代,通常每周2次。
操作步驟: 吸除舊培養(yang) 基,用不含鈣、鎂的PBS輕輕衝(chong) 洗細胞1-2次。
消化: 加入1mL 0.25% Trypsin-0.53mM EDTA消化液,37°C孵育1-2分鍾,觀察GT1-1細胞是否脫落。
終止消化: 輕敲培養(yang) 瓶,加入少量培養(yang) 基終止消化。
重懸: 補加6-8mL新鮮培養(yang) 基,輕輕吹打混勻。
分裝: 按1:2至1:6的比例將GT1-1細胞懸液分裝至新的培養(yang) 瓶中,補加新鮮培養(yang) 基至適當體(ti) 積。
細胞凍存
凍存液: 使用無血清凍存液。
分裝: 將GT1-1細胞懸液分裝至凍存管中。
降溫: 緩慢降溫至-80°C,然後轉移至液氮中長期保存。
注意事項
觀察: 定期檢查GT1-1細胞的形態和生長狀況。
無菌操作: 確保操作過程無菌,以避免汙染。
支原體(ti) 檢測: 定期進行支原體(ti) 檢測。
傳(chuan) 代次數: 控製GT1-1細胞的傳(chuan) 代次數,以維持細胞特性。
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