AtT-20細胞（小鼠垂體(ti) 瘤細胞）

ATT20細胞係是1966年從(cong) 患有腫瘤的小鼠垂體(ti) 中分離出，具有小而圓的細胞形態。

ATT20細胞係特征特性

• ATT20細胞能夠分泌促腎上腺皮質激素(ACTH)。
  

• ATT20細胞表達促腎上腺皮質激素(ACTH)基因。

• ATT20細胞具有抗脊髓灰質炎病毒的能力。

• ATT20細胞被檢測為(wei) 鼠痘病毒陰性
  

ATT20細胞係參數表

AtT-20小鼠垂體瘤細胞培養教程

細胞複蘇

• 將水浴鍋預熱至37℃。

• 用75%酒精擦拭超淨工作台，確保無菌環境。

• 從(cong) 液氮中取出AtT-20細胞，並迅速放入37℃水浴中快速解凍（約1-2分鍾）。

• 將解凍後的AtT-20細胞懸液緩慢加入到含有預熱培養(yang) 基的培養(yang) 瓶中，並輕輕搖晃，使AtT-20細胞均勻分散。

• AtT-20細胞的快速複蘇是保持其活力的重要步驟。

日常培養

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基或添加新鮮培養(yang) 基。

• 觀察AtT-20細胞的生長狀態，注意細胞團的形成。

• 定期觀察AtT-20細胞的生長狀態，以確保其在最佳條件下生長。

傳代

• 當AtT-20細胞密度達到約1×10^6 cells/mL時進行傳(chuan) 代。

• 輕輕搖晃培養(yang) 瓶，使AtT-20細胞均勻懸浮。

• 取適量細胞懸液，用細胞計數板計數。

• 按1:3或1:4的比例稀釋AtT-20細胞懸液到新的培養(yang) 瓶中。

• 添加新鮮預熱的培養(yang) 基至適當體(ti) 積。

細胞凍存

• 收集對數生長期的AtT-20細胞。

• 低速離心（約800-1000 rpm）5分鍾，棄去上清。

• 用無血清凍存液重懸AtT-20細胞，調整密度至1×10^6 - 5×10^6 cells/mL。

• 將AtT-20細胞懸液分裝到凍存管中。

• 使用程序降溫盒或細胞凍存容器，將AtT-20細胞緩慢降溫至-80℃。

• 24小時後轉移到液氮中長期保存。

注意事項

• AtT-20細胞在培養(yang) 時形成懸浮的細胞團，應避免過度吹打，以免破壞AtT-20細胞團結構。

• 定期檢查AtT-20細胞是否有汙染，包括支原體(ti) 、細菌、酵母和真菌。

• 建議在10代以內(nei) 使用AtT-20細胞，避免細胞老化和特性改變。

• 嚴(yan) 格遵守無菌操作規程，避免交叉汙染。

• 更換培養(yang) 基時需小心，以避免將AtT-20細胞誤倒。可采用離心法或自然沉降法進行。

培養基更換方法

• 離心法：將AtT-20細胞懸液轉移到離心管中，低速離心（800-1000 rpm）5分鍾，小心吸出上清，添加新鮮培養(yang) 基重懸AtT-20細胞。

• 自然沉降法：將培養(yang) 瓶靜置15-30分鍾，讓AtT-20細胞自然沉降，小心吸出上層培養(yang) 基，添加新鮮培養(yang) 基。

生長觀察

接種初期（0-24小時）

• AtT-20細胞呈單個(ge) 懸浮狀態或小的細胞團

• AtT-20細胞呈圓形，數量相對較少

對數生長期（24-72小時）

• AtT-20細胞開始形成更大的細胞團

• 細胞團數量增加，單個(ge) AtT-20細胞數量減少

• 細胞團大小不一

穩定生長期（72-120小時）

• AtT-20細胞團進一步增大，數量達到穩定

• 培養(yang) 基中可能出現一些代謝產(chan) 物

高密度期（120小時以上）

• 大量AtT-20細胞團懸浮在培養(yang) 基中

• AtT-20細胞團可能會(hui) 相互聚集形成更大的團塊

• 培養(yang) 基顏色可能發生變化，表明pH值改變