H22細胞（小鼠肝癌細胞）

H22細胞係最早由前蘇聯醫學科學院腫瘤研究所於(yu) 1952年通過在C3HA小鼠中誘導肝癌形成實體(ti) 瘤後建立。隨後，該瘤細胞懸液經過皮下移植至昆明種小鼠，最終轉化為(wei) 腹水瘤。這些細胞經過多次傳(chuan) 代後，能夠在多種小鼠品係中（如Km小鼠、615小鼠、C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠）形成實體(ti) 瘤和腹水瘤。後來，H22細胞係由大連醫科大學從(cong) 小鼠腹水中進一步分離並推廣。

H22細胞（小鼠肝癌細胞）參數表

H22小鼠肝癌細胞培養教程

H22細胞複蘇步驟

• 從(cong) 液氮中取出凍存的H22細胞，迅速置於(yu) 37°C水浴中，輕輕搖動，直至H22細胞完全解凍（約1-2分鍾）。

• 將解凍的H22細胞懸液轉移至10 mL完全培養(yang) 基的離心管中，輕輕混勻。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 將H22細胞重懸於(yu) 5 mL完全培養(yang) 基中，混勻後接種至培養(yang) 瓶中，接種密度為(wei) 3×10^5 - 5×10^5 cells/mL。

H22細胞的換液與傳代

• 換液頻率：每2-3天更換一次培養(yang) 基，以保持H22細胞的最佳生長環境。

• 當H22細胞生長至70%-80%匯合時，開始傳(chuan) 代。
  

• 用PBS輕柔洗滌H22細胞，去除殘留培養(yang) 基。

• 加入1-2 mL胰酶，消化H22細胞，持續觀察H22細胞脫落情況，通常需要1-2分鍾。

• 加入等體(ti) 積的完全培養(yang) 基終止消化，輕輕吹打混勻。

• 以1000 rpm離心5分鍾，棄去上清液。

• 將H22細胞重懸於(yu) 適量的完全培養(yang) 基中，並以接種密度為(wei) 3×10^5 - 5×10^5 cells/mL接種至新的培養(yang) 瓶中。

H22細胞凍存步驟

• 選取對數生長期的H22細胞，收集後離心去除培養(yang) 基。

• 用55%基礎培養(yang) 基、40% FBS和5% DMSO的凍存液重懸H22細胞。

• 將H22細胞分裝入凍存管中，逐步冷凍：先置於(yu) -80°C冰箱過夜，次日轉移至液氮中長期保存。

注意事項

• 懸浮細胞處理：H22細胞為(wei) 懸浮生長，收集時應注意保留所有培養(yang) 液，以免損失H22細胞。

• 傳(chuan) 代次數控製：H22細胞在體(ti) 外傳(chuan) 代4-5代後可能活力下降，可通過腹水培養(yang) 恢複其活力。

• 無菌操作：整個(ge) 操作過程應嚴(yan) 格無菌，以避免汙染。

H22細胞的收集和離心方法

• 設備無菌：確保所有離心管、培養(yang) 基和其他操作工具均為(wei) 無菌狀態。

• H22細胞收集：將培養(yang) 瓶中的H22細胞懸液輕輕混勻，確保H22細胞均勻分布。

• 離心操作：將H22細胞懸液轉移至無菌離心管，1000 rpm離心8-10分鍾。

• 去除上清液：小心去除上清液，保留H22細胞沉澱。

• 重懸H22細胞：加入適量完全培養(yang) 基，輕輕吹打混勻，進行接種或凍存。

通過腹水培養恢複H22細胞活力

• 實驗小鼠準備：選擇健康的昆明種小鼠進行實驗。

• 腹水誘導：將H22細胞懸液注射至小鼠腹腔中，通常注射量為(wei) 1×10^6 cells/mL。

• 腹水收集：注射後3-7天，通過腹腔穿刺收集腹水液體(ti) 。

• H22細胞分離：收集的腹水液體(ti) 離心1000 rpm，5-10分鍾，去除上清液，保留H22細胞沉澱。

• 重懸和培養(yang) H22細胞：用完全培養(yang) 基重懸H22細胞，並接種至新的培養(yang) 瓶中繼續培養(yang) 。