AML12細胞係（小鼠正常肝細胞係）

AML12細胞係源自3個(ge) 月齡的CD1-MT42轉基因小鼠（品係），這些小鼠的肝髒細胞被轉染了人源TGF-α基因。AML12細胞係由小鼠肝髒正常細胞建立，專(zhuan) 為(wei) 研究TGF-α的作用而開發。

AML12細胞係特性特征

• 分子特征：aml12細胞僅(jin) 含有乳酸脫氫酶的同工酶5、保留了典型的肝細胞超微結構

• AML12細胞保留了表達血清（白蛋白、α1抗胰蛋白酶和轉鐵蛋白）和縫隙連接（連接蛋白26和32）蛋白高水平mRNA的能力

• 表達高水平的人TGF-α和較低水平的小鼠TGF-α

• 基因特征：表達白蛋白基因、表達人TGF-α和小鼠TGF-α基因

• 在體(ti) 外培養(yang) 過程中，AML12細胞的肝髒特異性蛋白表達會(hui) 逐漸降低。然而，通過使用無血清培養(yang) 基可以有效地重新激活這些特定蛋白的表達

• aml12細胞不會(hui) 形成菌落或在軟瓊脂中生長

• 不致瘤性：aml12細胞在免疫抑製的小鼠中沒有致瘤性、倍增時間約37小時

• aml12細胞對培養(yang) 條件有特殊要求,如需要添加胰島素、轉鐵蛋白、硒和地塞米鬆等
  

AML12細胞係參數表

AML12小鼠正常肝細胞係培養教程

AML12細胞複蘇步驟

• 準備預熱至37°C的完全培養(yang) 基。

• 從(cong) 液氮或-80°C冰箱中取出AML12細胞凍存管，並在37°C水浴中快速解凍（約1分鍾）。

• 將解凍的AML12細胞懸液轉移到含5 ml預熱培養(yang) 基的15 ml離心管中。

• 以1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，用2 ml完全培養(yang) 基輕輕重懸AML12細胞沉澱。

• 將細胞懸液轉移到T25培養(yang) 瓶中，加入3-5 ml完全培養(yang) 基。

• 將培養(yang) 瓶置於(yu) 37°C、5% CO2培養(yang) 箱中培養(yang) 。

AML12細胞傳代

• 當AML12細胞密度達到70%-80%時進行傳(chuan) 代。

• 棄去舊培養(yang) 基，用PBS輕輕清洗AML12細胞1-2次。

• 加入適量胰酶-EDTA溶液，在37°C下消化2-3分鍾。

• 顯微鏡下觀察AML12細胞脫落情況，輕拍培養(yang) 瓶以促進脫落。

• 加入含血清的培養(yang) 基終止消化。

• 收集細胞懸液，1000 rpm離心5分鍾。

• 棄去上清，用新鮮完全培養(yang) 基重懸AML12細胞。

• 按1:2-1:4的比例將AML12細胞接種到新的培養(yang) 瓶中。

AML12細胞換液頻率

• 每2-3天更換一次培養(yang) 基。

AML12細胞培養注意事項

• 首次傳(chuan) 代比例：建議使用1:2的接種比例，之後可根據AML12細胞的生長情況調整為(wei) 1:2-1:4。

• 細胞觀察：定期觀察AML12細胞的形態和生長狀況，及時發現異常。

• 培養(yang) 條件：嚴(yan) 格控製培養(yang) 條件，避免培養(yang) 基汙染。確保培養(yang) 基的pH值保持在7.2-7.4之間。

• 傳(chuan) 代頻率：避免傳(chuan) 代時間過長，以免影響AML12細胞的活性。定期進行細胞鑒定，確保細胞特性未發生改變。

• 培養(yang) 箱使用：減少頻繁開關(guan) 培養(yang) 箱，保持溫度和CO2濃度的穩定。

• 離心注意：使用低速或低通量離心，避免對AML12細胞造成機械損傷(shang) 。

AML12細胞凍存

• 凍存液配方：90%胎牛血清 + 10% DMSO

• 細胞密度：>1x10^6 cells/ml

• 凍存方法：緩慢降溫後將AML12細胞轉入液氮中進行長期保存。

培養基配方及其作用

• DMEM/F12基礎培養(yang) 基（88%）：提供細胞生長所需的基本營養(yang) 物質、無機鹽和緩衝(chong) 係統，支持細胞的基本代謝和增殖。

• 優(you) 質胎牛血清（FBS，10%）：提供生長因子、激素和其他蛋白質，促進細胞的生長和增殖。

• ITS（胰島素+轉鐵蛋白+硒，1%）：

• 胰島素：促進葡萄糖和氨基酸的吸收，有助於(yu) 細胞生長。

• 轉鐵蛋白：運輸鐵離子，參與(yu) 細胞代謝。

• 硒：作為(wei) 抗氧化劑，保護細胞免受氧化損傷(shang) 。

• 地塞米鬆（Dexamethasone，40 ng/ml）：維持肝細胞特異性功能，促進肝髒特異性基因的表達。

• 青黴素-鏈黴素（P/S，1%）：抑製細菌生長，防止培養(yang) 基汙染。